【摘 要】
：
大量研究表明葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PDH)在响应生物和非生物胁迫方面具有重要作用,为进一步研究珍贵濒危藏药材尼泊尔黄堇对极端环境的适应性,本研究根据尼泊尔黄堇转录组信息设计ChG6PDH扩增引物,利用PCR克隆获得ChG6PDH 基因,构建原核表达载体ChG6PDH-pMAL-C2x,将其导入大肠杆菌BL21菌株诱导表达,利用亲和层析法对重组蛋白进行纯化,并用6-磷酸葡萄糖为底物在37℃对其进行体外酶活力检测.结果表明,重组可溶性蛋
【机 构】
：
青海大学生态环境工程学院,西宁,810016;青海大学藏医学院,西宁,810016
论文部分内容阅读
大量研究表明葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PDH)在响应生物和非生物胁迫方面具有重要作用,为进一步研究珍贵濒危藏药材尼泊尔黄堇对极端环境的适应性,本研究根据尼泊尔黄堇转录组信息设计ChG6PDH扩增引物,利用PCR克隆获得ChG6PDH 基因,构建原核表达载体ChG6PDH-pMAL-C2x,将其导入大肠杆菌BL21菌株诱导表达,利用亲和层析法对重组蛋白进行纯化,并用6-磷酸葡萄糖为底物在37℃对其进行体外酶活力检测.结果表明,重组可溶性蛋白最佳诱导条件为0.5 mmol/L的异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在37℃诱导5 h,SDS-PAGE和Western Blot检测纯化的酶蛋白,发现ChG6PDH蛋白分子量为60 kD.体外活性测定表明MPB-ChG6PDH蛋白具有G6PDH酶催化能力,酶活力是3 228 nmol? min-1?mg-1 prot.该研究结果为尼泊尔黄堇G6PDH酶蛋白的功能研究提供基础.
其他文献
为了更好地利用甘蔗野生种蔗茅(Erianthus fulvus Ness.)的抗逆相关基因,并为转基因甘蔗抗逆育种提供可靠的候选基因.本研究利用电子克隆和RT-PCR的方法在蔗茅野生种\'蔗茅99-2\'中克隆到一个干旱诱导表达基因,并命名为FfNAC (GenBank登录号:MT499790).生物信息学分析表明,FfNAC基因ORF长度为765 bp,共编码254个氨基酸,具有一个保守的NAM结构域.编码的蛋白以无规则卷曲和α-螺旋为主,没有信号肽,具有多个磷酸化位点,没有跨膜结构.本研究为深
GRF转录因子参与多种生长发育过程,包括根、茎、叶和花的发育等.本研究基于荔枝转录组测序结果,共鉴定出22个GRF基因并分析其蛋白理化性质、系统进化、基因结构、miRNA靶基因和组织表达分析.结果表明,22个GRF蛋白的大小为72～246 aa,分子量为8 055.41～250 929.9 Da,等电点为4.96～10.44.大部分GRF蛋白为亲脂蛋白并主要定位于细胞核中.系统进化分析将其分为6类,相较于水稻,荔枝与拟南芥GRF的亲缘关系更近.22个GRF基因均含有WRC或QLQ结构域,同一类基因含有相似
YUCCA基因编码黄素单加氧酶,是IAA生物合成主要限速酶基因之一,在植物生长发育中起着重要调控作用.本研究对白梨全基因组数据库进行筛选鉴定,获得梨YUCCA基因家族基因14个,这些基因非均等地分布在8条染色体上.生物信息学分析发现,梨YUCCA基因长度相差较大,含有2或3个内含子;基因具有10个保守基序,其中黄素嘌呤二核苷酸结合位点和还原型辅酶Ⅱ结合位点为基因家族所共有.基因家族亲缘关系分析显示,梨YUCCA基因家族可以分为2个类群,与苹果YUCCA基因亲缘关系较近.亚细胞定位和结构分析显示,梨YUCC
胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)基因组中有一个编码含Rieske和SRPBCC结构域蛋白的基因CgCntA.为了研究CgCntA的功能,利用同源重组原理构建了该基因的敲除突变体菌株,并进一步对其表型进行了分析.结果发现,CgGntA的缺失不影响胶孢炭疽菌的营养生长.在预先刺伤的叶片上,CgCntA缺失突变体的发病率及病斑大小与野生型菌株没有明显差异;而在完整无伤口的叶片上,CgCntA缺失突变体的发病率及病斑大小明显低于野生型菌株,说明CgCntA与胶孢炭疽菌侵染
植物CIPK蛋白激酶家族(CBL-interacting protein kinase)是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族,该家族成员通过与上游的CBL蛋白(Calcineurin B-like protein)互作,形成CBL-CIPK信号系统,参与调控植物的生长发育和逆境胁迫响应过程.早期研究发现,拟南芥AtCIPK24分别通过与AtCBL4和AtCBL10互作,激活下游靶蛋白的活性,应对高盐胁迫.本研究前期从林烟草中获得了 1个与拟南芥AtCIPK24同源的基因Nsyl-rnCIPK24a,但与其互作
类受体蛋白激酶(receptor-like protein kinases,RLKs)在植物的生长发育以及应答各种微生物侵染和不同环境胁迫的信号传递途径中发挥着重要作用.为初步探究C型凝集素类受体激酶基因家族在巴西橡胶树中的功能,本研究在橡胶树转录组测序基础上,通过RT-PCR方法扩增获得1个C型凝集素类受体激酶基因,命名为HbClecRLK1.该基因包含1个1 626 bp的完整开放阅读框,编码一个541个氨基酸的多肽.生物信息学分析结果表明,HbClecRLK1蛋白包括3个保守结构域:凝集素类识别结构
为研究青蒿素合成的关键酶基因AaADS过表达对黄花蒿腺毛发育和青蒿素含量的影响,本研究根据GenBank收录的黄花蒿AaADS基因启动子和cDNA序列设计引物,采用同源克隆的方法从黄花蒿品种(428-A)中扩增出AaADS基因启动子和cDNA序列.构建GUS报告载体AaADSpro∷GUS和植物表达载体AoADSpro∷AaADS,利用农杆菌介导的叶盘转化法转化黄花蒿.通过对转基因植株叶片腺毛的GUS基因活性检测和不同组织器官AaADS基因RT-PCR半定量分析,以及过表达AaADS基因的植株叶片下表皮腺
快速碱化因子(rapid alkalinization factors,RALFs)是一种植物多肽类激素,参与胞内MAPK信号传递、细胞伸长调控、花器官发育及免疫应答等植物重要生理过程.本研究利用生物信息学方法对橡胶树RALF基因家族进行全基因组鉴定,对其序列特性、基因结构、保守基序、系统进化及表达特性进行系统研究.通过同源比对在橡胶树基因组中共鉴定到16个RALF基因,分别命名为HbRALF1～HbRALF16.序列分析结果表明,这些基因编码氨基酸数目介于108～149 aa之间,分子量和等电点分别介于
FKF1在光周期途径中是响应蓝光节律表达的基因,在光周期途径中有重要的作用.为探索二穗短柄草BdFKF1基因的表达模式、亚细胞定位和蛋白互作关系,本研究通过RT-qPCR分析BdFKF1基因在长日照、短日照、连续光照、连续黑暗、昼夜颠倒和长日照下昼夜节律与光周期的调控;构建绿色荧光蛋白融合表达载体转化烟草观察亚细胞定位;同时运用酵母双杂筛选结合初步鉴定2个互作蛋白BdCDF1和BdGI,并用双分子荧光互补(BiFC)和免疫共沉淀法(Co-Immunoprecipitation)进行验证.RT-qPCR分析
本研究以杂交粳稻\'花优14\'及其亲本为材料,利用SSR分子标记技术,对其多态性进行了引物筛选和种子纯度鉴定研究.从48对广泛分布在水稻12条染色体上的候选SSR分子标记中,筛选得到6对引物,在\'花优14\'和其双亲之间表现为稳定的共显性且能将杂交种及其亲本完全区分,利用这些引物对\'花优14\'种子进行分子纯度鉴定,并将鉴定结果与田间小区种植纯度鉴定结果相比较,结果显示两者鉴定结果基本一致.因此,最终确定了多态性位点最多且特异性差异最显著的RM274和RM1195标记组合作为