【摘 要】
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目的 探讨盐酸小檗碱(berberine hydrochloride,BBH)与氟康唑(fluconazole,FLC)联用对氟康唑耐药白色念珠菌(Candida albicans,CA)的协同抑菌作用及其对细胞内Ca2+稳态的影响
【机 构】
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成都中医药大学,四川成都611137;成都中医药大学附属医院
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目的 探讨盐酸小檗碱(berberine hydrochloride,BBH)与氟康唑(fluconazole,FLC)联用对氟康唑耐药白色念珠菌(Candida albicans,CA)的协同抑菌作用及其对细胞内Ca2+稳态的影响.方法 棋盘稀释法筛选对白色念珠菌耐药株具有协同抑制作用的最低浓度盐酸小檗碱与氟康唑组合,XTT减低法测定动态抑菌效果.采用倒置荧光显微镜和流式细胞术检测细胞内Ca2+内流情况,RT-qPCR技术检测Ca2+稳态关键基因的表达量,评价两药联用对耐药白色念珠菌Ca2+稳态的影响.试验设两组单用组及不加药(空白)组作对照. 结果 联合用药的部分抑菌浓度指数最小的药物浓度组合为盐酸小檗碱2 μg/ml+氟康唑1 μg/ml.两药联用组在0～48 h内动态抑菌效果显著优于两药单用组和空白对照组(P＜0.05),两药联用具有协同作用(FICI＜ 0.5).联用组、盐酸小檗碱单用组处理后白色念珠菌细胞内Ca2+内流现象明显,且联用组细胞内Ca2+浓度均比盐酸小檗碱单用组和氟康唑单用组分别高1.07-2、1.17-8.39倍(P＜0.05),但氟康唑单用组与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).联用组和盐酸小檗碱单用组液泡钙通道YVC1基因上调,氟康唑单用组YVC1基因下调,联用组YVC1基因表达量比盐酸小檗碱单用组和氟康唑单用组分别高1.62、6.47倍(P＜0.05).联用组和盐酸小檗碱单用组液泡钙泵PMC1基因下调,氟康唑单用组PMC1基因上调,联用组和盐酸小檗碱单用组PMC1基因的表达量比氟康唑单用组分别低80.86％和80.59％ (P＜0.05). 结论 盐酸小檗碱与氟康唑联用对氟康唑耐药白色念珠菌具有协同抑菌作用,盐酸小檗碱可能通过影响白色念珠菌液泡膜上的钙离子调节器Pmc1p和Yvc1p促进质膜内Ca2+内流,破坏钙离子稳态,从而增加耐药株对氟康唑药物的敏感性.
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