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目的:考察双酶法制备哈蟆油蛋白的最佳工艺。方法:以哈蟆油为原料,采用柠檬酸浸提和水煎煮的方法提取哈蟆油蛋白,先后加入胃蛋白酶和碱性蛋白酶进行酶解,根据酶解后哈蟆油蛋白相对分子质量分布,应用单因素和正交试验确定哈蟆油蛋白酶解的最佳条件。结果:最佳酶解条件为胃蛋白酶与底物比(m/m)1:2000、酶解时间2h、碱性蛋白酶与底物比(m/m)1:100、酶解时间6h,酶解后哈蟆油蛋白相对分子质量小于5000所占的比例为94.85%,哈蟆油蛋白中蛋白质含量为49.85%。结论:胃蛋白酶与碱性蛋白酶结合使用可以有效地