观察脓毒症对大鼠膈肌乙酰胆碱受体不同亚基变化的影响。
方法健康雄性SD大鼠48只,周龄8周,体重220~250 g,实验动物由郑州大学基础医学院实验动物中心提供,采用随机数字表法分为4组,每组12只,空白对照组(Con组)、假手术组(Sham组)、盲肠结扎穿孔后9 h组(CLP9组)、盲肠结扎穿孔后18 h组(CLP18组)。通过盲肠结扎穿孔(CLP)建立脓毒症大鼠模型,取带有膈神经的10 mm宽膈肌肌条,通过蛋白质印迹法(Western blot)和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)分别检测来比较不同组大鼠膈肌内乙酰胆碱受体γ亚基和ε亚基蛋白水平和mRNA水平的变化。多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用t检验。
结果Western blot和Real-time PCR结果显示,Con组和Sham组两组γ亚基(Western blot:0.187±0.008比0.192±0.009,t=1.734,P>0.05;Real-time PCR: 1.000±0.002比1.013±0.004,t=1.343,P>0.05)和ε亚基无明显变化(Western blot: 1.467±0.006比1.467±0.009,t=0.029,P>0.05;Real-time PCR: 1.000±0.003比0.996±0.027,t=0.468,P>0.05);和Sham组比较,CLP18组γ亚基明显增加(Western blot: 0.192±0.009比1.160±0.077,t=43.520,P<0.01;Real-time PCR:1.013±0.004比8.369±0.194,t=131.400,P<0.01),CLP9组γ亚基表达增加(Western blot: 0.192±0.009比0.373±0.037,t=16.380,P<0.01;Real-time PCR: 1.013±0.004比5.440±0.135,t=113.800,P<0.01);和CLP9组比较,CLP18组γ亚基上调(Western blot: 0.373±0.037比1.160±0.077,t=32.010,P<0.01;Real-time PCR: 5.440±0.135比8.369±0.194,t=42.970,P<0.01);然而ε亚基变化与之相反。
结论脓毒症引起大鼠膈肌乙酰胆碱受体γ亚基上调,乙酰胆碱受体ε亚基下调;两种亚基改变程度与脓毒症严重程度有关。