【摘 要】
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以检测水牛成纤维细胞中组蛋白乙酰转移酶(HAT1)和脱乙酰化酶(HDAC1)转录活性为例,对SYBRGreen实时荧光定量PCR技术平台的建立进行了探讨。结果显示,适宜的引物,高质量RNA反
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以检测水牛成纤维细胞中组蛋白乙酰转移酶(HAT1)和脱乙酰化酶(HDAC1)转录活性为例,对SYBRGreen实时荧光定量PCR技术平台的建立进行了探讨。结果显示,适宜的引物,高质量RNA反转录得到的cDNA以及合适的PCR体系为SYBR Green实时荧光定量PCR能否成功的关键因素。本试验中3对引物的灵敏度高,其反应性能完全满足SYBR Green实时荧光定量PCR的要求。2个目的基因HAT1、HDAC1的扩增效率与参照基因H2A接近,试验结果可用2-△△Ct计算法进行分析。当cDNA模板量为0.5μL(相当于总RNA 50 ng),引物为1μmol/L时,SYBR Green实时荧光定量PCR能高效获得特异性强的目的产物。
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