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摘要：在山东济南和浙江杭州、河南焦作三地进行了毒死蜱在花生上最终残留试验，采用气相色谱法测定毒死蜱在花生及土壤中的残留量。结果表明，施药后到采收期时花生中的毒死蜱残留量均低于0.2 mg/kg。30%毒死蜱微囊悬浮剂用于防治花生蛴螬，施药剂量不超过2 250 g a.i./hm2 （推荐高剂量）、施药1次是安全的。
关键词：毒死蜱；花生；气相色谱；残留
中图分类号：Q781文献标识号：A文章编号：1001-4942（2013）01-0122-04
花生是我国重要的油料作物和经济作物，也是重要的食用油源、蛋白质来源和食品工业的理想原料[1]。蛴螬俗名白地蚕，为多食性害虫，可为害多种作物，尤喜食大豆、花生等作物。近年来蛴螬危害加重，严重影响了花生的产量和品质。30%毒死蜱微囊悬浮剂是专门为防治花生蛴螬而研制的长效、高效控制释放新剂型[2]。
毒死蜱（Chlorpyrifos）是一种高效、广谱的杀虫剂，化学名称为O，O-二乙基-O-（3，5，6-三氯-2-吡啶基）硫逐磷酸酯，属杂环类有机磷农药，具有触杀、胃毒和熏蒸等作用[3]。毒死蜱在菠菜、韭菜、小白菜等以及小麦、猕猴桃上的残留研究已有报道[4～9]，段劲生[10]、陈炳坤[11]等也对花生中毒死蜱的残留量及消解动态作了研究，但样品的净化过程多采用液液萃取或过单一弗罗里硅土柱等方法，所用仪器有气相、液相[12，13]、气-质[14]、液-质[15]等。本试验采用弗罗里硅土+氧化铝（质量比2∶1）层析柱净化，GC-FPD（气相色谱-火焰光度检测器）定性、定量的方法，测定了花生植株、仁、壳及土壤中毒死蜱残留量，可为制定相关合理使用准则提供依据。1材料与方法
1.1材料
30%毒死蜱微囊悬浮剂；毒死蜱标准品（1 000 mg/L）；丙酮（分析纯，重蒸馏），乙酸乙酯（分析纯，重蒸馏），石油醚、乙腈、氯化钠、无水硫酸钠均为分析纯，氧化铝（层析用）；弗罗里硅土：250～150 μm，650℃下活化4 h，用前于130℃烘2 h，加5%水减活，混匀备用。
气相色谱仪：Agilent 6890N，FPD，带自动进样器；高速匀浆机：德国IKA公司T25 Basic型；超声波提取器：昆山市超声仪器有限公司KQ-500型；旋转蒸发仪：德国Heidolph LABOROTA 4000。
1.2田间试验及样品制备
于2009年和2010年在山东省济南市、浙江省杭州市、河南省焦作市进行了30%毒死蜱微囊悬浮剂在花生上的最终残留试验。选择未施用过毒死蜱的花生田块，按照《农药残留试验准则》[16]的要求，共设2 250 g a.i./hm2（推荐最高剂量）施药1次、3 375 g a.i./hm2（推荐最高剂量的1.5倍）施药1次和空白对照3个处理，随机区组排列，重复3次，小区面积不小于30 m2。
在花生播种时，药剂对水用喷雾器均匀喷施于播种穴内，浅土覆盖（每666.7m2用药液40 kg，花生密度按每666.7m2种植8 000穴计算，每穴喷药液5 ml）。于花生收获期采集样品两次。每小区随机多点采集土壤（0～15 cm）1 kg，花生1 kg，花生秧1 kg以上，同时采集空白样品。
按照《农药登记残留田间试验标准操作规程》[17]的要求，对花生植株、花生仁、花生壳、土壤样品进行处理后置于-20℃冰箱保存。
1.3分析方法
1.3.1样本提取土壤：称取样品20 g于具塞广口瓶中，加水10 ml，分3次加入40、40、30 ml丙酮-石油醚（体积比1∶1），超声波各提取15 min，经无水硫酸钠层过滤于平底烧瓶中，于35℃旋转蒸发器上减压浓缩至约1 ml，待净化。
花生植株：称取样品20 g，加入丙酮-乙酸乙酯（体积比1∶1）溶液100 ml，高速匀浆30 s，转移到加有10 g氯化钠的具塞量筒中，摇匀，静置30 min后，准确移取50 ml上层浸提液，于旋转蒸发器浓缩至约1 ml，待净化。
花生壳：称取样品10 g于具塞广口瓶中，分3次加入40、40、30 ml丙酮，超声波各提取15 min，经无水硫酸钠层过滤于平底烧瓶中，于旋转蒸发器上浓缩至约1 ml，待净化。
花生仁：称取样品10 g于具塞广口瓶中，分3次加入40、40、30 ml乙腈，超声波各提取15 min，经无水硫酸钠层过滤于平底烧瓶中，于旋转蒸发器上浓缩至约1 ml，待净化。
1.3.2净化用玻璃层析柱净化浓缩的样品。柱内下部塞脱脂棉，加入少许无水硫酸钠，再加入5 g氧化铝+弗罗里硅土（质量比2∶1），上部以无水硫酸钠封顶，用50 ml石油醚预淋，将浓缩物上柱，依次用石油醚-乙酸乙酯（体积比4∶1）10、20、30 ml洗脱，收集洗脱液，于旋转蒸发器上浓缩至近干，乙酸乙酯定容至500 ml，待测。如定容后的样品溶液过于混浊，应用0.2 μm滤膜过滤后再进行测定。
1.3.3气相色谱条件色谱柱：HP1701，25 m×0.32 mm×0.25 μm；柱温：160℃保持4 min，10℃/min升温至250℃，保持8 min；进样口温度：250℃；检测器温度：300℃；柱压力：1.03×105 Pa；进样量：1 μl。2结果与分析
2.1方法线性和检测限
在上述仪器条件下，得到毒死蜱保留时间为16.4 min（见图1）。将一定量的标准品用丙酮溶解后，配制一系列不同浓度的标准溶液，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标测得定标准曲线：Y=1624.8X-19.316，r=0.9998。毒死蜱的最低检出量为5.0×10-11 g，在土壤、植株、花生壳和花生仁中的最低检出浓度均为0.01 mg/kg。
2.2准确度和精密度 在空白样品中分别定量加入不同质量分数水平的毒死蜱标准溶液，用上述分析方法检测，得到不同质量分数下的回收率，回收率在85.0%～101.5%之间，相对标准偏差为1.4%～9.3%，均符合残留分析的要求（见表1）。
2.3最终残留试验
从两年试验结果（表2）来看，毒死蜱施药剂量为2 250 g a.i./hm2时，在植株中的残留最高为0.02 mg/kg，土壤中的残留量为<0.01～0.05 mg/kg，花生壳和花生仁中的残留量均<0.01mg/kg。施药剂量为3 375 g a.i./ hm2时，在植株中的残留最高为0.05 mg/kg，土壤中的残留量为<0.01～0.06 mg/kg，花生壳和花生仁中的残留量≤0.01 mg/kg。 3结论
本试验采用不同溶剂、不同方法对花生植株、花生仁、花生壳、土壤中残留的毒死蜱进行提取，提取物采用过氧化铝+弗罗里硅土（质量比2∶1）固相萃取柱净化，用带FPD检测器的气相色谱仪测定。该方法前处理采用氧化铝+弗罗里硅土（质量比2∶1）固相萃取柱净化，主要是考虑到花生仁含油脂较多，单一弗罗里硅土柱无法起到去除油脂的作用，用乙腈提取花生仁中的毒死蜱并在固相萃取柱中加入氧化铝后可有效去除样品中的油脂。
中国规定毒死蜱在花生中的MRL值为0.2 mg/kg。本试验结果表明，毒死蜱在花生中的残留量均小于0.2 mg/kg。由此得出结论：30%毒死蜱微囊悬浮剂用于防治花生蛴螬，施药剂量不超过2 250 g a.i./hm2 （推荐高剂量）、在花生播种时药剂兑水用喷雾器均匀喷施于播种穴内 （穴施）1次是安全的。
参考文献：
[1]Tang R H， Gao G Q， He L Q， et al. Genetic diversity in cultivated groundnut based on SSR markers[J]. Journal of Genetics and Genomics （FormerlyActa Genetica Sinica）， 2007， 34（5）： 449-459.
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[4]赵学平， 袁玉伟， 胡秀卿， 等. 茚虫威和毒死蜱在小白菜中的残留及其膳食暴露评估[J]. 浙江农业学报， 2010， 22（6）： 784-789.
[5]陈振德， 陈雪辉， 冯明祥， 等. 毒死蜱在菠菜中的残留动态研究[J]. 农业环境科学学报， 2005， 24（4）： 728-731.
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[16]中华人民共和国农业部. NY/T 788-2004. 农药残留试验准则[S]. 北京： 中国农业出版社， 2004.
[17]王运浩. 农药登记残留田间试验标准操作规程[M]. 北京： 中国标准出版社， 2007.
关键词：毒死蜱；花生；气相色谱；残留
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花生是我国重要的油料作物和经济作物，也是重要的食用油源、蛋白质来源和食品工业的理想原料[1]。蛴螬俗名白地蚕，为多食性害虫，可为害多种作物，尤喜食大豆、花生等作物。近年来蛴螬危害加重，严重影响了花生的产量和品质。30%毒死蜱微囊悬浮剂是专门为防治花生蛴螬而研制的长效、高效控制释放新剂型[2]。
毒死蜱（Chlorpyrifos）是一种高效、广谱的杀虫剂，化学名称为O，O-二乙基-O-（3，5，6-三氯-2-吡啶基）硫逐磷酸酯，属杂环类有机磷农药，具有触杀、胃毒和熏蒸等作用[3]。毒死蜱在菠菜、韭菜、小白菜等以及小麦、猕猴桃上的残留研究已有报道[4～9]，段劲生[10]、陈炳坤[11]等也对花生中毒死蜱的残留量及消解动态作了研究，但样品的净化过程多采用液液萃取或过单一弗罗里硅土柱等方法，所用仪器有气相、液相[12，13]、气-质[14]、液-质[15]等。本试验采用弗罗里硅土+氧化铝（质量比2∶1）层析柱净化，GC-FPD（气相色谱-火焰光度检测器）定性、定量的方法，测定了花生植株、仁、壳及土壤中毒死蜱残留量，可为制定相关合理使用准则提供依据。1材料与方法
1.1材料
30%毒死蜱微囊悬浮剂；毒死蜱标准品（1 000 mg/L）；丙酮（分析纯，重蒸馏），乙酸乙酯（分析纯，重蒸馏），石油醚、乙腈、氯化钠、无水硫酸钠均为分析纯，氧化铝（层析用）；弗罗里硅土：250～150 μm，650℃下活化4 h，用前于130℃烘2 h，加5%水减活，混匀备用。
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1.3分析方法
1.3.1样本提取土壤：称取样品20 g于具塞广口瓶中，加水10 ml，分3次加入40、40、30 ml丙酮-石油醚（体积比1∶1），超声波各提取15 min，经无水硫酸钠层过滤于平底烧瓶中，于35℃旋转蒸发器上减压浓缩至约1 ml，待净化。
花生植株：称取样品20 g，加入丙酮-乙酸乙酯（体积比1∶1）溶液100 ml，高速匀浆30 s，转移到加有10 g氯化钠的具塞量筒中，摇匀，静置30 min后，准确移取50 ml上层浸提液，于旋转蒸发器浓缩至约1 ml，待净化。
花生壳：称取样品10 g于具塞广口瓶中，分3次加入40、40、30 ml丙酮，超声波各提取15 min，经无水硫酸钠层过滤于平底烧瓶中，于旋转蒸发器上浓缩至约1 ml，待净化。
花生仁：称取样品10 g于具塞广口瓶中，分3次加入40、40、30 ml乙腈，超声波各提取15 min，经无水硫酸钠层过滤于平底烧瓶中，于旋转蒸发器上浓缩至约1 ml，待净化。
1.3.2净化用玻璃层析柱净化浓缩的样品。柱内下部塞脱脂棉，加入少许无水硫酸钠，再加入5 g氧化铝+弗罗里硅土（质量比2∶1），上部以无水硫酸钠封顶，用50 ml石油醚预淋，将浓缩物上柱，依次用石油醚-乙酸乙酯（体积比4∶1）10、20、30 ml洗脱，收集洗脱液，于旋转蒸发器上浓缩至近干，乙酸乙酯定容至500 ml，待测。如定容后的样品溶液过于混浊，应用0.2 μm滤膜过滤后再进行测定。
1.3.3气相色谱条件色谱柱：HP1701，25 m×0.32 mm×0.25 μm；柱温：160℃保持4 min，10℃/min升温至250℃，保持8 min；进样口温度：250℃；检测器温度：300℃；柱压力：1.03×105 Pa；进样量：1 μl。2结果与分析
2.1方法线性和检测限
在上述仪器条件下，得到毒死蜱保留时间为16.4 min（见图1）。将一定量的标准品用丙酮溶解后，配制一系列不同浓度的标准溶液，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标测得定标准曲线：Y=1624.8X-19.316，r=0.9998。毒死蜱的最低检出量为5.0×10-11 g，在土壤、植株、花生壳和花生仁中的最低检出浓度均为0.01 mg/kg。
2.2准确度和精密度 在空白样品中分别定量加入不同质量分数水平的毒死蜱标准溶液，用上述分析方法检测，得到不同质量分数下的回收率，回收率在85.0%～101.5%之间，相对标准偏差为1.4%～9.3%，均符合残留分析的要求（见表1）。
2.3最终残留试验
从两年试验结果（表2）来看，毒死蜱施药剂量为2 250 g a.i./hm2时，在植株中的残留最高为0.02 mg/kg，土壤中的残留量为<0.01～0.05 mg/kg，花生壳和花生仁中的残留量均<0.01mg/kg。施药剂量为3 375 g a.i./ hm2时，在植株中的残留最高为0.05 mg/kg，土壤中的残留量为<0.01～0.06 mg/kg，花生壳和花生仁中的残留量≤0.01 mg/kg。 3结论
本试验采用不同溶剂、不同方法对花生植株、花生仁、花生壳、土壤中残留的毒死蜱进行提取，提取物采用过氧化铝+弗罗里硅土（质量比2∶1）固相萃取柱净化，用带FPD检测器的气相色谱仪测定。该方法前处理采用氧化铝+弗罗里硅土（质量比2∶1）固相萃取柱净化，主要是考虑到花生仁含油脂较多，单一弗罗里硅土柱无法起到去除油脂的作用，用乙腈提取花生仁中的毒死蜱并在固相萃取柱中加入氧化铝后可有效去除样品中的油脂。
中国规定毒死蜱在花生中的MRL值为0.2 mg/kg。本试验结果表明，毒死蜱在花生中的残留量均小于0.2 mg/kg。由此得出结论：30%毒死蜱微囊悬浮剂用于防治花生蛴螬，施药剂量不超过2 250 g a.i./hm2 （推荐高剂量）、在花生播种时药剂兑水用喷雾器均匀喷施于播种穴内 （穴施）1次是安全的。
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