【摘 要】
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目的 研究分析Notch配体DLL3在胃癌细胞中的表达以及对胃癌细胞增殖、转移的影响.方法 通过选用PCR扩增人全长DLL3基因并克隆至真核表达载体pCMV-Tgh4中,根据转染pCMV-Tag4质
【机 构】
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青海红十字医院胃肠外科,青海省西宁市,810000
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目的 研究分析Notch配体DLL3在胃癌细胞中的表达以及对胃癌细胞增殖、转移的影响.方法 通过选用PCR扩增人全长DLL3基因并克隆至真核表达载体pCMV-Tgh4中,根据转染pCMV-Tag4质粒和无转染HEK293T细胞分为阴性对照和空白对照,进一步检测人全长DLL3基因在人正常胃上皮细胞GES-1和AGS等3株胃癌细胞中的表达差异,检测DLL3过表达后胃癌细胞的增殖以及DLL3下调后胃癌细胞的增殖.结果 全长人DLL3/pCMV-Tag4为模板,PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳后结果表示特异性目的条带可于1 800 bp左右可见,重组质粒能够得到4 300 bp与1 800 bp的片段,将其进一步进行DNA测序,测序结果比对后将该阳性克隆命为DLL3/pCMV-Tag4.无转染质粒HEK293T细胞与对照组相比,DLL3的mRNA水平明显升高,且于78 000 bp处存在一条特异性目的条带,对照组尚未检测出.人DLL3mRNA于AGS等胃癌细胞中表达明显高于正常胃上皮细胞GES-1,人DLL3在胃癌细胞中的表达量明显高于正常胃上皮细胞GES-1.转染DLL3/pCMV-Tag4后于68 000 bp以及78 000 bp处存在两条特异性目的条带,而对照组只有1条目的条带,DLL3在胃癌细胞中过表达成功,且DLL3的过表达能够促进胃癌细胞的增殖.转染24 h,DLL3-siRNA转染组中DLL3表达明显少于Control siRNA组,说明特异性人DLL3-siRNA在胃癌细胞中成功转移DLL3表达,且转移DLL3抑制了胃癌细胞的增殖.结论 人全长DLL3/pCMV-Tgh4真核表达质粒能够成功建立,Notch配体中的DLL3与胃癌细胞增殖具有相关性,下调DLL3的表达水平能够有效抑制胃癌细胞的增殖.
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