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摘 要：
采用密闭熏蒸法及抑菌圈法测定了氯化苦、棉隆、威百亩、1，3-二氯丙烯及11种杀细菌剂对樱桃根癌病菌的毒力。结果表明：威百亩、棉隆、氯化苦对樱桃根癌病菌的EC50为1.5881、2.7902、5.0475 μg/mL，分别为1，3-二氯丙烯的519.60、295.74、163.48倍；杀细菌剂对樱桃根癌病菌的抑菌效果最为明显的是1 000亿活芽孢/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂、72%农用硫酸链霉素可溶性粉剂、85%三氯异氰尿酸可溶性粉剂和46%氢氧化铜水分散粒剂，可应用于田间药效试验进一步验证。
关键词： 熏蒸剂；杀细菌剂；樱桃根癌病菌；毒力测定
中图分类号： S436.629 文献标识号：A 文章编号： 1001 - 4942（2014）08 - 0117 - 04
Toxicity Test of Several Fumigants and Bactericides against
Agrobacterium tumefaciens in Laboratory
Fan Kun，Qu Jianlu，Wang Tao，Qi Bin
（Shandong Institute of Pomology，Taian 271000， China）
Abstract The toxicity of four fumigants， chloropicrin， dazomet， metham sodium and 1，3-dichloropropene and 11 kinds of bactericides against Agrobacterium tumefaciens were detected in laboratory by using airtight fumigation and inhibition zone. The results showed that the EC50 value of metham sodium， dazomet， chloropicrin to A. tumefaciens were 1.5881， 2.7902 and 5.0475 μg/mL， which were 519.60， 295.74 and 163.48 times of that of 1，3-dichloropropene， respectively. In the bactericides， bacillus subtilis WP with 1011 living spores per gram， 72% streptomycin sulfate SP， 85% trichloroisocyanuric acid SP and 46% copper hydroxide WDG had the most obvious bacteriostasis effects， so they could be applied in field for further verification.
Key words Fumigant； Bactericide； Agrobacterium tumefaciens； Toxicity test
大樱桃是我国的主要经济作物之一，因其具有较高的营养价值和经济效益，近几年发展迅速，种植面积日益扩大。但由于苗木带病和栽培技术不当，根癌病危害日益严重，成为目前大樱桃生产中面临的主要瓶颈，并有逐渐加重的趋势，给果农造成了巨大的经济损失。
土壤处理是防治土传病害的重要途径，熏蒸剂因其杀灭效果高、在土壤中残留时间短、对农作物相对安全而得到广泛应用[1]。常用的熏蒸剂又以溴甲烷（methyl bromide）为主。但自20世纪90年代以来，大量研究证实溴甲烷能破坏大气臭氧层，是现已查明的89种臭氧层消耗物质（ODS）之一，且2015年将被全面淘汰[2]。目前其主要替代品氯化苦、棉隆、威百亩、1，3-二氯丙烯等在田间均对土传病害表现出了一定的防治效果[3～5]，但未见其对樱桃根癌病防治效果的报道。为筛选出田间防治樱桃根癌病的有效药剂，本试验对目前田间常用熏蒸剂及杀细菌剂进行了室内毒力测定，以期为熏蒸剂在我国樱桃根癌病防治上的推广应用提供理论依据和应用技术。
1 材料与方法
1.1 供试药剂
熏蒸剂：99.5%的氯化苦（chloropicrin） 液剂（辽宁大连绿峰化学股份有限公司），98%的棉隆（dazomet） 微粒剂（江苏省南通施壮化工有限公司），1，3-二氯丙烯（1，3-dichloropropene，1，3-D）原药（山东聚利化工溶剂厂），35%威百亩（metham sodium）水剂（江苏利民化工有限责任公司）。
杀细菌剂：1 000亿活芽孢/g枯草芽孢杆菌（bacillus subtilis）可湿性粉剂（德强生物股份有限公司）、72%农用硫酸链霉素（streptomycin sulfate）可溶性粉剂（华北制药股份有限公司）、85%三氯异氰尿酸（trichloroisocyanuric acid）可溶性粉剂（天津百胜化工有限公司）、46%氢氧化铜（copper hydroxide）水分散粒剂（美国杜邦公司）、86.2%氧化亚铜（cuprous oxide）可湿性粉剂（挪威劳道克斯公司）、20%叶枯唑（bismerthiazol）可湿性粉剂（浙江龙湾化工有限公司）、40%二氯异氰尿酸（sodium dichloroisocyanurate）可溶性粉剂（山西康派伟业生物科技有限公司）、2%宁南霉素（ningnanmycin）水剂（德强生物股份有限公司）、23%松脂酸铜乳油（山东禾宜生物科技有限公司）、20%噻唑锌悬浮剂（浙江新农化工股份有限公司）、5%井冈霉素（jinggangmycin）水剂（山东曹达化工有限公司）。 1.2 供试病原菌及培养基
3 结论与讨论
樱桃根癌病菌 （Agrobacterium tumefaciens） 属根癌土壤杆菌属，是一种严重危害樱桃生长的土传性病原细菌，盛果期树势衰弱时发病更严重，并且传播速度很快，可在3～5年内出现毁园[10]。目前樱桃根癌病之所以发生危害严重，概括起来主要有以下两个方面：一是樱桃品种抗性差，大多数为高感或中感品种；二是樱桃种植园土壤中病菌残存量大，病菌在土壤中存活时间长，且雨水、灌溉、修剪及昆虫、苗木带菌都能传播病菌，防治更加困难。因此应及早重视该病的预防，避免重茬地育苗，种植前苗木检查和消毒等。
目前，国内外还未见熏蒸剂对樱桃根癌病菌毒力的系统报道，本研究选择目前常用土壤熏蒸剂和杀细菌剂对樱桃根癌病菌进行室内毒力测定，研究结果表明，熏蒸剂威百亩、棉隆、氯化苦对樱桃根癌病菌表现出较高的毒力；1，3-二氯丙烯作为生产上常用的土壤熏蒸杀线虫剂，对于多种土传病害具有良好的防治效果[11，12]，但本研究结果表明，1，3-二氯丙烯对樱桃根癌病菌的活性相对较低，EC50为825.1682 μg/mL，不太适合用于防治樱桃根癌病。不同杀细菌剂对樱桃根癌病菌的抑制效果差异很大。其中，抑菌效果最为明显的药剂是1 000亿活芽孢/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂、72%农用硫酸链霉素可溶性粉剂、85%三氯异氰尿酸可溶性粉剂和46%氢氧化铜水分散粒剂，可选择继续应用于田间药效试验验证其防治效果。
有研究证明，氯化苦在土壤中被激活状态下可生成一种诱导细菌有机体突变的代谢物，对土壤杆菌属细菌防治效果较好[13]，还能有效控制土传病原真菌，如腐霉属、镰刀菌属、疫霉属、丝核菌属等[14]。本研究结果表明，氯化苦对樱桃根癌病菌表现出显著的抑制作用，这与有关报道相符[13]。1，3-二氯丙烯为播前土壤熏蒸杀线虫剂，对杂草、土传真菌的厚垣孢子、菌核活性较差[15]，对细菌病害的效果也不突出。因此，生产上常用1，3-二氯丙烯和氯化苦混用来扩大防治谱，被认为是溴甲烷土壤消毒最好的替代品，该混剂已在澳大利亚、西班牙、美国等国家广泛使用，在我国果树根部病害防治中的作用值得进行田间药效试验进一步评价。
参 考 文 献：
[1] 张鑫，卜东欣，张超，等.四种熏蒸剂对辣椒疫霉和南方根结线虫的毒力[J].植物保护学报，2013，40（5）：463-467.
[2] 范昆，王开运，夏晓明，等.溴甲烷土壤消毒替代品的研究进展[J].世界农药，2006，28（2）：45-47.
[3] Ben-Yephet Y， Melero-Vera J M， Devay J E. Interaction of soil solarization and metham-sodiun in the destruction of Verticillium dahliae and Fusarium oxysporum f.sp. vasinfectum [J].Crop Protection，1988，7（5）：327-331.
[4] Minuto A， Gullino M L， Lamberti F， et al. Application of an emulsifiable mixture of 1，3-dichloropropene and chloropicrin against root knot nematodes and soilborne fungi for greenhouse tomatoes in Italy[J]. Crop Protection，2006，25：1244-1252.
[5] Jiang Z Q， Guo Y H， Li S M. Evaluation of biocontrol efficiency of different Bacillus preparations and field application methods against Phytophthora blight of bell pepper[J].Biological Control，2006，36（2）：216-223.
[6] 方中达. 植病研究方法[M].北京：中国农业出版社，1998.
[7] 杨媚，黄永辉，舒灿伟，等.香蕉枯萎病菌4号生理小种粗毒素特性的研究[J].园艺学报，2012，39（3）：545-551.
[8] Fernandow G D，Ramarathnam R，Krishnamoorthy A S，et al.Identification and use of potential bacterial organic antifungal volatiles in biocontrol[J]. Soil Biol. Biochem.，2005，37（5）：955-964.
[9] 姚锦爱，余德亿，黄鹏，等. ‘隆丰黑李’细菌性穿孔病病害调查及杀菌剂对其病原菌毒力测定[J]. 热带作物学报，2013，34（1）：130-134.
[10] 冯瑛，蔡宇良，宛甜，等.樱桃冠瘿病病原的分离与鉴定[J]. 西北农林科技大学学报，2013，41（10）：165-171.
[11] Duniway J M. Status of chemical alternatives to methyl bromide for pre-plant fumigation of soil[J]. Phytopathology， 2002， 92： 1337-1343.
[12] Lamastra L， Ferrari F， Fait G， et al. Higher-tier assessment of the potential for groundwater issues due to the use of 1，3-D soil fumigant； evaluation of the active ingredient， metabolites and potentially related chlorinated compounds[J]. Pest Management Science， 2011， 67： 1439-1445.
[13] Gan J，Yates S R，Femst F.Degradation and volatilization of the fumigant chloropierin after soil treatment [J].J. Environ. Quality，2000，29（5）：1391-1397.
[14] 杨晓楠，高德良，韩君，等. 棉隆及氯化苦对几种生姜土传病原物的毒力 [J].农药学学报，2011，13（3）：331-334.
[15] Csinos A S，Jhon W C， Jihnson A W.Alternative fumigants for methly bromide in tobacco and pepper transplant production [J]. Crop Prot.，1997，16（6）：585-594.
采用密闭熏蒸法及抑菌圈法测定了氯化苦、棉隆、威百亩、1，3-二氯丙烯及11种杀细菌剂对樱桃根癌病菌的毒力。结果表明：威百亩、棉隆、氯化苦对樱桃根癌病菌的EC50为1.5881、2.7902、5.0475 μg/mL，分别为1，3-二氯丙烯的519.60、295.74、163.48倍；杀细菌剂对樱桃根癌病菌的抑菌效果最为明显的是1 000亿活芽孢/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂、72%农用硫酸链霉素可溶性粉剂、85%三氯异氰尿酸可溶性粉剂和46%氢氧化铜水分散粒剂，可应用于田间药效试验进一步验证。
关键词： 熏蒸剂；杀细菌剂；樱桃根癌病菌；毒力测定
中图分类号： S436.629 文献标识号：A 文章编号： 1001 - 4942（2014）08 - 0117 - 04
Toxicity Test of Several Fumigants and Bactericides against
Agrobacterium tumefaciens in Laboratory
Fan Kun，Qu Jianlu，Wang Tao，Qi Bin
（Shandong Institute of Pomology，Taian 271000， China）
Abstract The toxicity of four fumigants， chloropicrin， dazomet， metham sodium and 1，3-dichloropropene and 11 kinds of bactericides against Agrobacterium tumefaciens were detected in laboratory by using airtight fumigation and inhibition zone. The results showed that the EC50 value of metham sodium， dazomet， chloropicrin to A. tumefaciens were 1.5881， 2.7902 and 5.0475 μg/mL， which were 519.60， 295.74 and 163.48 times of that of 1，3-dichloropropene， respectively. In the bactericides， bacillus subtilis WP with 1011 living spores per gram， 72% streptomycin sulfate SP， 85% trichloroisocyanuric acid SP and 46% copper hydroxide WDG had the most obvious bacteriostasis effects， so they could be applied in field for further verification.
Key words Fumigant； Bactericide； Agrobacterium tumefaciens； Toxicity test
大樱桃是我国的主要经济作物之一，因其具有较高的营养价值和经济效益，近几年发展迅速，种植面积日益扩大。但由于苗木带病和栽培技术不当，根癌病危害日益严重，成为目前大樱桃生产中面临的主要瓶颈，并有逐渐加重的趋势，给果农造成了巨大的经济损失。
土壤处理是防治土传病害的重要途径，熏蒸剂因其杀灭效果高、在土壤中残留时间短、对农作物相对安全而得到广泛应用[1]。常用的熏蒸剂又以溴甲烷（methyl bromide）为主。但自20世纪90年代以来，大量研究证实溴甲烷能破坏大气臭氧层，是现已查明的89种臭氧层消耗物质（ODS）之一，且2015年将被全面淘汰[2]。目前其主要替代品氯化苦、棉隆、威百亩、1，3-二氯丙烯等在田间均对土传病害表现出了一定的防治效果[3～5]，但未见其对樱桃根癌病防治效果的报道。为筛选出田间防治樱桃根癌病的有效药剂，本试验对目前田间常用熏蒸剂及杀细菌剂进行了室内毒力测定，以期为熏蒸剂在我国樱桃根癌病防治上的推广应用提供理论依据和应用技术。
1 材料与方法
1.1 供试药剂
熏蒸剂：99.5%的氯化苦（chloropicrin） 液剂（辽宁大连绿峰化学股份有限公司），98%的棉隆（dazomet） 微粒剂（江苏省南通施壮化工有限公司），1，3-二氯丙烯（1，3-dichloropropene，1，3-D）原药（山东聚利化工溶剂厂），35%威百亩（metham sodium）水剂（江苏利民化工有限责任公司）。
杀细菌剂：1 000亿活芽孢/g枯草芽孢杆菌（bacillus subtilis）可湿性粉剂（德强生物股份有限公司）、72%农用硫酸链霉素（streptomycin sulfate）可溶性粉剂（华北制药股份有限公司）、85%三氯异氰尿酸（trichloroisocyanuric acid）可溶性粉剂（天津百胜化工有限公司）、46%氢氧化铜（copper hydroxide）水分散粒剂（美国杜邦公司）、86.2%氧化亚铜（cuprous oxide）可湿性粉剂（挪威劳道克斯公司）、20%叶枯唑（bismerthiazol）可湿性粉剂（浙江龙湾化工有限公司）、40%二氯异氰尿酸（sodium dichloroisocyanurate）可溶性粉剂（山西康派伟业生物科技有限公司）、2%宁南霉素（ningnanmycin）水剂（德强生物股份有限公司）、23%松脂酸铜乳油（山东禾宜生物科技有限公司）、20%噻唑锌悬浮剂（浙江新农化工股份有限公司）、5%井冈霉素（jinggangmycin）水剂（山东曹达化工有限公司）。 1.2 供试病原菌及培养基
3 结论与讨论
樱桃根癌病菌 （Agrobacterium tumefaciens） 属根癌土壤杆菌属，是一种严重危害樱桃生长的土传性病原细菌，盛果期树势衰弱时发病更严重，并且传播速度很快，可在3～5年内出现毁园[10]。目前樱桃根癌病之所以发生危害严重，概括起来主要有以下两个方面：一是樱桃品种抗性差，大多数为高感或中感品种；二是樱桃种植园土壤中病菌残存量大，病菌在土壤中存活时间长，且雨水、灌溉、修剪及昆虫、苗木带菌都能传播病菌，防治更加困难。因此应及早重视该病的预防，避免重茬地育苗，种植前苗木检查和消毒等。
目前，国内外还未见熏蒸剂对樱桃根癌病菌毒力的系统报道，本研究选择目前常用土壤熏蒸剂和杀细菌剂对樱桃根癌病菌进行室内毒力测定，研究结果表明，熏蒸剂威百亩、棉隆、氯化苦对樱桃根癌病菌表现出较高的毒力；1，3-二氯丙烯作为生产上常用的土壤熏蒸杀线虫剂，对于多种土传病害具有良好的防治效果[11，12]，但本研究结果表明，1，3-二氯丙烯对樱桃根癌病菌的活性相对较低，EC50为825.1682 μg/mL，不太适合用于防治樱桃根癌病。不同杀细菌剂对樱桃根癌病菌的抑制效果差异很大。其中，抑菌效果最为明显的药剂是1 000亿活芽孢/g枯草芽孢杆菌可湿性粉剂、72%农用硫酸链霉素可溶性粉剂、85%三氯异氰尿酸可溶性粉剂和46%氢氧化铜水分散粒剂，可选择继续应用于田间药效试验验证其防治效果。
有研究证明，氯化苦在土壤中被激活状态下可生成一种诱导细菌有机体突变的代谢物，对土壤杆菌属细菌防治效果较好[13]，还能有效控制土传病原真菌，如腐霉属、镰刀菌属、疫霉属、丝核菌属等[14]。本研究结果表明，氯化苦对樱桃根癌病菌表现出显著的抑制作用，这与有关报道相符[13]。1，3-二氯丙烯为播前土壤熏蒸杀线虫剂，对杂草、土传真菌的厚垣孢子、菌核活性较差[15]，对细菌病害的效果也不突出。因此，生产上常用1，3-二氯丙烯和氯化苦混用来扩大防治谱，被认为是溴甲烷土壤消毒最好的替代品，该混剂已在澳大利亚、西班牙、美国等国家广泛使用，在我国果树根部病害防治中的作用值得进行田间药效试验进一步评价。
参 考 文 献：
[1] 张鑫，卜东欣，张超，等.四种熏蒸剂对辣椒疫霉和南方根结线虫的毒力[J].植物保护学报，2013，40（5）：463-467.
[2] 范昆，王开运，夏晓明，等.溴甲烷土壤消毒替代品的研究进展[J].世界农药，2006，28（2）：45-47.
[3] Ben-Yephet Y， Melero-Vera J M， Devay J E. Interaction of soil solarization and metham-sodiun in the destruction of Verticillium dahliae and Fusarium oxysporum f.sp. vasinfectum [J].Crop Protection，1988，7（5）：327-331.
[4] Minuto A， Gullino M L， Lamberti F， et al. Application of an emulsifiable mixture of 1，3-dichloropropene and chloropicrin against root knot nematodes and soilborne fungi for greenhouse tomatoes in Italy[J]. Crop Protection，2006，25：1244-1252.
[5] Jiang Z Q， Guo Y H， Li S M. Evaluation of biocontrol efficiency of different Bacillus preparations and field application methods against Phytophthora blight of bell pepper[J].Biological Control，2006，36（2）：216-223.
[6] 方中达. 植病研究方法[M].北京：中国农业出版社，1998.
[7] 杨媚，黄永辉，舒灿伟，等.香蕉枯萎病菌4号生理小种粗毒素特性的研究[J].园艺学报，2012，39（3）：545-551.
[8] Fernandow G D，Ramarathnam R，Krishnamoorthy A S，et al.Identification and use of potential bacterial organic antifungal volatiles in biocontrol[J]. Soil Biol. Biochem.，2005，37（5）：955-964.
[9] 姚锦爱，余德亿，黄鹏，等. ‘隆丰黑李’细菌性穿孔病病害调查及杀菌剂对其病原菌毒力测定[J]. 热带作物学报，2013，34（1）：130-134.
[10] 冯瑛，蔡宇良，宛甜，等.樱桃冠瘿病病原的分离与鉴定[J]. 西北农林科技大学学报，2013，41（10）：165-171.
[11] Duniway J M. Status of chemical alternatives to methyl bromide for pre-plant fumigation of soil[J]. Phytopathology， 2002， 92： 1337-1343.
[12] Lamastra L， Ferrari F， Fait G， et al. Higher-tier assessment of the potential for groundwater issues due to the use of 1，3-D soil fumigant； evaluation of the active ingredient， metabolites and potentially related chlorinated compounds[J]. Pest Management Science， 2011， 67： 1439-1445.
[13] Gan J，Yates S R，Femst F.Degradation and volatilization of the fumigant chloropierin after soil treatment [J].J. Environ. Quality，2000，29（5）：1391-1397.
[14] 杨晓楠，高德良，韩君，等. 棉隆及氯化苦对几种生姜土传病原物的毒力 [J].农药学学报，2011，13（3）：331-334.
[15] Csinos A S，Jhon W C， Jihnson A W.Alternative fumigants for methly bromide in tobacco and pepper transplant production [J]. Crop Prot.，1997，16（6）：585-594.