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[目的]为了探究湘西黄牛的遗传多样性与母系起源。[方法]采用PCR扩增、测序及生物信息学方法。[结果]在33头湘西黄牛mtDNAD-loop区共检测到55个变异位点，界定了15个mtDNA单倍型，单倍型多样度为0．8750，核苷酸多样度为0．0144，表明湘西黄牛的遗传多样性较低。构建的系统发育树表明湘西黄牛具有普通牛和瘤牛两大母系起源。[结论]湘西黄牛的遗传多样性较低，属于中国南方黄牛，有瘤牛和普通牛两个母系起源，受瘤牛的影响更大。