【摘 要】
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目的:以原代培养的小鼠大脑皮质神经元为研究工具,优化电穿孔转染条件。方法:通过设置不同的电压和脉冲时间组合等电转染条件,将表达绿色荧光蛋白(GFP)的shNC质粒导入小鼠大
【机 构】
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第四军医大学基础部人体解剖与组织胚胎学教研室暨梁銶锯脑研究中心,
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目的:以原代培养的小鼠大脑皮质神经元为研究工具,优化电穿孔转染条件。方法:通过设置不同的电压和脉冲时间组合等电转染条件,将表达绿色荧光蛋白(GFP)的shNC质粒导入小鼠大脑皮质神经元,24 h后观察并比较神经元的转染效率,确定最佳电转染条件。结果:200 v电压,25 ms脉冲时间或250 v电压,15 ms脉冲时间的转染条件下,小鼠大脑皮质神经元可获得较好的转染效率,分别为(31.15±1.89)%和(29.10±1.93)%。结论:电穿孔转染是一种高效的基因转染方法,通过条件的优化,可以提高小鼠大脑皮质神经元的电转染效率。
OBJECTIVE: To optimize the electroporation transfection conditions using primary cultured mouse cerebral cortex neurons as a research tool. Methods: The shNC plasmid expressing green fluorescent protein (GFP) was introduced into the cerebral cortex neurons of mice by setting different voltage and pulse time isoelectric transfection conditions. After 24 h, the transfection efficiency of neurons was observed and compared Optimal transfection conditions. RESULTS: Under the conditions of 200 v voltage, 25 ms pulse time, 250 v voltage and 15 ms pulse time, the transfection efficiency of mouse cerebral cortex neurons were better (31.15 ± 1.89)% and ( 29.10 ± 1.93)%. CONCLUSION: Electroporation is a highly efficient method of gene transfection. By optimizing the conditions, the transfection efficiency of mouse cerebral cortical neurons can be increased.
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