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摘要：目的：观察通脑舒络胶囊对小鼠脑缺血缺氧的保护作用，及其对大鼠血栓形成和小鼠凝血时间的影响。方法：采用断头及双侧颈总动脉合并迷走神经结扎法造成小鼠急性脑缺血模型，采用大鼠动、静脉吻合法形成血栓和毛细玻璃管法测定小鼠凝血时间，观察药物对脑缺血缺氧的保护作用、对血栓形成的抑制作用及对凝血时间的延长。结果：通脑舒络胶囊能显著延长脑缺血缺氧小鼠的存活时间，减轻大鼠血栓重量，延长凝血时间。结论：通脑舒络对脑缺血缺氧具有保护作用，并能抑制血栓形成，延长凝血时间。
关键词：通脑舒络胶囊；脑缺血缺氧；血栓形成；凝血时间
中图分类号：R743.31
文献标识码：A
文章编号：1007—2349(2007)05—0037—02
心脑血管疾病是目前发病率最高、对人类健康威胁最为严重的疾病之一，其中80％以上为缺血性脑血管病。脑缺血性疾病发生在局部脑血流减少甚至完全丧失的基础上，目前对其治疗主要以溶栓恢复缺血组织血液灌流为主。
通脑舒络胶囊是江苏省中医药研究院根据名医验方制作而成，有多年的临床应用基础，具有很好的临床疗效，主要用于脑中风治疗。本文采用断头及双侧颈总动脉合并迷走神经结扎法造成小鼠急性脑缺氧缺血模型，大鼠动、静脉吻合法形成血栓等方法，观察通脑舒络胶囊对脑缺血的保护作用及其对血栓形成和凝血时间的影响，为中药验方提供理论依据和实验数据。
1、实验动物及材料
1.1 实验动物昆明种小鼠，18～22g；SD清洁级大鼠，体重280～320g，购于上海斯莱克实验动物有限公司，合格证号：SCXK(沪)2003—0003，饲养环境清洁级，合格证号：SCXK(苏)2002—0052。
1.2材料 通脑舒络胶囊混悬液，蒸馏水稀释至所需浓度；尼莫地平片，广州华南药业有限公司生产，20mg／片，批号060201；阿司匹林肠溶片，南京白敬宇制药有限公司，25mg／片，批号060601。
2、方法
2.1 对小鼠急性脑缺氧的保护作用 昆明种小鼠70只，体重18～22g，雌雄各半，将小鼠随机分为5组，即对照组、阳性药组和给药高、中、低剂量组。给药组分别灌胃给予通脑舒络胶囊混悬液11、5.5、2.75g生药／kg，对照组灌胃给予同体积的蒸馏水，阳性药组灌胃给予尼莫地平20mg／kg，灌胃给药7d，于末次给药后1h，参照文献方法将小鼠双耳后颈部逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止的时间。
2.2双侧颈总动脉合并迷走神经结扎致小鼠脑缺血 昆明种小鼠70只，体重18～22g，雌雄各半，分组同2.1，灌胃给药7d，于末次给药后1h，清醒状态下仰位固定，颈部正中切口，分离双侧颈总动脉合并迷走神经，以0号手术线，在近心端和远心端分别穿线，结扎同时开始计时，剪断双侧颈总动脉合并迷走神经，完全阻断大脑血流。记录各组小鼠的存活时间(以小鼠末次腹式呼吸为观察指标)。
2.3大鼠体内血栓形成(动静脉旁路法) 雄性SD大鼠50只，280～380g，随机分为5组，每组10只。即对照组、阳性药组和给药高、中、低剂量组。给药组分别灌胃给予通脑舒络胶囊混悬液5.5、2.75、1.375g生药／kg，对照组灌胃给予同体积的蒸馏水，阳性药组灌胃给予阿司匹林30mg／kg。大鼠以20％乌拉坦(6ml／kg，ip)麻醉后，分离右颈内动脉及左颈外动脉，以置入6cm 4～0手术丝线的聚乙烯管连通，形成动静脉旁路。分别舌下静脉给药15min后，开放血流15min，取出丝线称重，总重减去丝线重即为血栓湿重。按下式计算抑制百分率，抑制率(％)=(对照组血栓湿重一给药组血栓湿重)／对照组血栓湿重×100。
2.4小鼠凝血时间测定 昆明种小鼠70只，体重18～22g，雌雄各半。将小鼠随机分为5组，即对照组、阳性药组和给药高、中、低剂量组。给药组分别灌胃给予通脑舒络胶囊混悬液11、5.5、2.75g生药／kg，对照组灌胃给予同体积的蒸馏水，阳性药组灌胃给予阿司匹林60mg／kg，灌胃给药6d。末次给药后1h，眼后静脉丛取血，以毛细管法测定凝血时间(CT)L3J。
2.5统计学方法 所有结果以均数±标准差(x±s)表示。组间比较采用t检验，组间率的比较采用x2检验。
3、结果
3.1对小鼠急性脑缺氧的影响与对照组比较，通脑舒络胶囊中、高剂量组能明显延长小鼠断头喘气时间(P<0.05或0.01)。见表1。
与对照组相比，*P<0.05，**P％0.01
3.2对双侧颈总动脉合并迷走神经结扎小鼠存活时间的影响与对照组比较，通脑舒络胶囊中、高剂量组能明显提高双侧颈总动脉合并迷走神经结扎小鼠的存活时间(P<0.05或0.01)。见表2。
4、讨论
脑是高级神经中枢，对血供的需求很大，脑重只占体重的2％～3％，却利用了全身耗氧量的20％～25％，葡萄糖的75％。脑组织的氧、葡萄糖的储备极少，一旦血流完全阻断，6秒钟内神经细胞代谢即可受到影响，几分钟内能量代谢和离子平衡就发生紊乱，因此脑血流的充足供应是脑功能正常和结构完整的首要条件Ⅲ。小鼠颅内脑血管之间有吻合枝，单独结扎双侧颈总动脉不出现明显脑缺血症状，当将迷走神经和颈总动脉一起结扎时，则迷走神经受到刺激引起血压下降，可产生脑缺血。在同时结扎双侧颈总动脉和迷走神经后，大脑因为血流供应的减少出现供氧减少而出现明显缺氧症状，模型动物绝大多数在内死亡。在断头实验中，脑血液供应中断，但脑中原有的血和营养物质尚能使脑功能维持一段时间，表现为小鼠规律地喘气，当能量耗至一定程度，活动终止。实验表明通脑舒络胶囊3个剂量组均可延长结扎双侧颈总动脉小鼠的存活时间，通脑舒络胶囊高、中剂量能显著延长断头小鼠的喘息时间，使脑耗氧量降低，增加神经细胞耐缺氧能力，对急性脑缺血缺氧有明显的拮抗作用，提示该药能具有提高机体的血氧利用率，降低机体的耗氧量，增加动物血管动静脉血氧量，从而提高组织利用氧的能力，促进对动物心脑等重要器官的供氧需求，对脑组织有明显的保护作用。
凝血系统和纤维蛋白溶解系统的动态平衡，既保证了血液有潜在的可凝固性，又始终保证了血液的流体状态。然而，有时在某些能促进凝血过程的因素作用下，打破了上述动态平衡，触发凝血过程，血液便可在血管腔内凝固，形成血栓。脑缺血时，血液处于高凝、高粘、高聚状态，血栓的形成是其重要的生理病理过程之一。实验表明通脑舒络胶囊各剂量组能显著抑制大鼠动静脉旁路血栓的形成，提示能够对抗血栓的形成。缺血性心脑血管病的病理生理过程中存在着凝血一纤溶的异常变化。而凝血过程是一个多因子参与的复杂过程，既可由血管内膜损伤激活的“内源途径”引发，也可由血管外的凝血因子与血液接触而启动的“外源途径”引发。实验表明通脑舒络胶囊中、高剂量能显著延长小鼠凝血时间，从而也有对抗血栓生成的作用。
本文初步证实通脑舒络胶囊能够保护脑缺血缺氧，延长凝血时间，抑制血栓形成，其作用机制有待进一步探讨。
关键词：通脑舒络胶囊；脑缺血缺氧；血栓形成；凝血时间
中图分类号：R743.31
文献标识码：A
文章编号：1007—2349(2007)05—0037—02
心脑血管疾病是目前发病率最高、对人类健康威胁最为严重的疾病之一，其中80％以上为缺血性脑血管病。脑缺血性疾病发生在局部脑血流减少甚至完全丧失的基础上，目前对其治疗主要以溶栓恢复缺血组织血液灌流为主。
通脑舒络胶囊是江苏省中医药研究院根据名医验方制作而成，有多年的临床应用基础，具有很好的临床疗效，主要用于脑中风治疗。本文采用断头及双侧颈总动脉合并迷走神经结扎法造成小鼠急性脑缺氧缺血模型，大鼠动、静脉吻合法形成血栓等方法，观察通脑舒络胶囊对脑缺血的保护作用及其对血栓形成和凝血时间的影响，为中药验方提供理论依据和实验数据。
1、实验动物及材料
1.1 实验动物昆明种小鼠，18～22g；SD清洁级大鼠，体重280～320g，购于上海斯莱克实验动物有限公司，合格证号：SCXK(沪)2003—0003，饲养环境清洁级，合格证号：SCXK(苏)2002—0052。
1.2材料 通脑舒络胶囊混悬液，蒸馏水稀释至所需浓度；尼莫地平片，广州华南药业有限公司生产，20mg／片，批号060201；阿司匹林肠溶片，南京白敬宇制药有限公司，25mg／片，批号060601。
2、方法
2.1 对小鼠急性脑缺氧的保护作用 昆明种小鼠70只，体重18～22g，雌雄各半，将小鼠随机分为5组，即对照组、阳性药组和给药高、中、低剂量组。给药组分别灌胃给予通脑舒络胶囊混悬液11、5.5、2.75g生药／kg，对照组灌胃给予同体积的蒸馏水，阳性药组灌胃给予尼莫地平20mg／kg，灌胃给药7d，于末次给药后1h，参照文献方法将小鼠双耳后颈部逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止的时间。
2.2双侧颈总动脉合并迷走神经结扎致小鼠脑缺血 昆明种小鼠70只，体重18～22g，雌雄各半，分组同2.1，灌胃给药7d，于末次给药后1h，清醒状态下仰位固定，颈部正中切口，分离双侧颈总动脉合并迷走神经，以0号手术线，在近心端和远心端分别穿线，结扎同时开始计时，剪断双侧颈总动脉合并迷走神经，完全阻断大脑血流。记录各组小鼠的存活时间(以小鼠末次腹式呼吸为观察指标)。
2.3大鼠体内血栓形成(动静脉旁路法) 雄性SD大鼠50只，280～380g，随机分为5组，每组10只。即对照组、阳性药组和给药高、中、低剂量组。给药组分别灌胃给予通脑舒络胶囊混悬液5.5、2.75、1.375g生药／kg，对照组灌胃给予同体积的蒸馏水，阳性药组灌胃给予阿司匹林30mg／kg。大鼠以20％乌拉坦(6ml／kg，ip)麻醉后，分离右颈内动脉及左颈外动脉，以置入6cm 4～0手术丝线的聚乙烯管连通，形成动静脉旁路。分别舌下静脉给药15min后，开放血流15min，取出丝线称重，总重减去丝线重即为血栓湿重。按下式计算抑制百分率，抑制率(％)=(对照组血栓湿重一给药组血栓湿重)／对照组血栓湿重×100。
2.4小鼠凝血时间测定 昆明种小鼠70只，体重18～22g，雌雄各半。将小鼠随机分为5组，即对照组、阳性药组和给药高、中、低剂量组。给药组分别灌胃给予通脑舒络胶囊混悬液11、5.5、2.75g生药／kg，对照组灌胃给予同体积的蒸馏水，阳性药组灌胃给予阿司匹林60mg／kg，灌胃给药6d。末次给药后1h，眼后静脉丛取血，以毛细管法测定凝血时间(CT)L3J。
2.5统计学方法 所有结果以均数±标准差(x±s)表示。组间比较采用t检验，组间率的比较采用x2检验。
3、结果
3.1对小鼠急性脑缺氧的影响与对照组比较，通脑舒络胶囊中、高剂量组能明显延长小鼠断头喘气时间(P<0.05或0.01)。见表1。
与对照组相比，*P<0.05，**P％0.01
3.2对双侧颈总动脉合并迷走神经结扎小鼠存活时间的影响与对照组比较，通脑舒络胶囊中、高剂量组能明显提高双侧颈总动脉合并迷走神经结扎小鼠的存活时间(P<0.05或0.01)。见表2。
4、讨论
脑是高级神经中枢，对血供的需求很大，脑重只占体重的2％～3％，却利用了全身耗氧量的20％～25％，葡萄糖的75％。脑组织的氧、葡萄糖的储备极少，一旦血流完全阻断，6秒钟内神经细胞代谢即可受到影响，几分钟内能量代谢和离子平衡就发生紊乱，因此脑血流的充足供应是脑功能正常和结构完整的首要条件Ⅲ。小鼠颅内脑血管之间有吻合枝，单独结扎双侧颈总动脉不出现明显脑缺血症状，当将迷走神经和颈总动脉一起结扎时，则迷走神经受到刺激引起血压下降，可产生脑缺血。在同时结扎双侧颈总动脉和迷走神经后，大脑因为血流供应的减少出现供氧减少而出现明显缺氧症状，模型动物绝大多数在内死亡。在断头实验中，脑血液供应中断，但脑中原有的血和营养物质尚能使脑功能维持一段时间，表现为小鼠规律地喘气，当能量耗至一定程度，活动终止。实验表明通脑舒络胶囊3个剂量组均可延长结扎双侧颈总动脉小鼠的存活时间，通脑舒络胶囊高、中剂量能显著延长断头小鼠的喘息时间，使脑耗氧量降低，增加神经细胞耐缺氧能力，对急性脑缺血缺氧有明显的拮抗作用，提示该药能具有提高机体的血氧利用率，降低机体的耗氧量，增加动物血管动静脉血氧量，从而提高组织利用氧的能力，促进对动物心脑等重要器官的供氧需求，对脑组织有明显的保护作用。
凝血系统和纤维蛋白溶解系统的动态平衡，既保证了血液有潜在的可凝固性，又始终保证了血液的流体状态。然而，有时在某些能促进凝血过程的因素作用下，打破了上述动态平衡，触发凝血过程，血液便可在血管腔内凝固，形成血栓。脑缺血时，血液处于高凝、高粘、高聚状态，血栓的形成是其重要的生理病理过程之一。实验表明通脑舒络胶囊各剂量组能显著抑制大鼠动静脉旁路血栓的形成，提示能够对抗血栓的形成。缺血性心脑血管病的病理生理过程中存在着凝血一纤溶的异常变化。而凝血过程是一个多因子参与的复杂过程，既可由血管内膜损伤激活的“内源途径”引发，也可由血管外的凝血因子与血液接触而启动的“外源途径”引发。实验表明通脑舒络胶囊中、高剂量能显著延长小鼠凝血时间，从而也有对抗血栓生成的作用。
本文初步证实通脑舒络胶囊能够保护脑缺血缺氧，延长凝血时间，抑制血栓形成，其作用机制有待进一步探讨。