【摘 要】
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目的研究小鼠Rnf148基因表达的时空特异性及其环指结构域的E3泛素连接酶功能。方法提取不同成年小鼠组织、不同胚胎期组织和出生后小鼠睾丸组织的总RNA,通过实时荧光RT-PCR和
【机 构】
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四川大学华西医院医学遗传学研究室生物治疗国家重点实验室疾病基因组学研究室; 四川省人民医院·四川省医学科学院器官移植研究所;
【基金项目】
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中央高校基本科研业务费(No.2010SCU11025)资助
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目的研究小鼠Rnf148基因表达的时空特异性及其环指结构域的E3泛素连接酶功能。方法提取不同成年小鼠组织、不同胚胎期组织和出生后小鼠睾丸组织的总RNA,通过实时荧光RT-PCR和Northern杂交分析小鼠Rnf148基因的表达谱。构建包含整个Rnf148蛋白的环指结构域与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的融合蛋白原核表达载体,在BL21细菌中诱导表达后,经GST琼脂糖凝胶纯化GST-Rnf148重组蛋白。体外泛素化反应试验检测GST-Rnf148重组蛋白的E3泛素连接酶功能。结果在小鼠13种不同器官组织中,Rnf148mRNA仅存在于睾丸组织中。进一步Northern杂交验证了只在小鼠睾丸组织表达一个1.2kb左右的Rnf148基因mRNA片段。小鼠Rnf148基因在胚胎期及出生后3周内不表达,出生后21d开始表达,25d后达到表达高峰并一直持续表达。实验成功诱导表达并纯化了GST-Rnf148重组蛋白,体外蛋白泛素化反应显示该重组蛋白具有E3泛素连接酶的功能。结论小鼠Rnf148基因特异地表达在出生3周后的睾丸组织中,Rnf148蛋白的环指结构域具有泛素连接酶活性。
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