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摘 要：本实验以羟基红花黄色素A为指标对经舒宁颗粒提取和醇沉工艺进行研究。经舒宁颗粒的提取和醇沉最佳工艺为加10倍纯化水，回流提取40分钟，连续两次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩至质量浓度为1.15克/毫升。待一次浓缩膏冷却，放至搅拌罐中，缓缓加入乙醇，边加边搅拌至均匀，使终点乙醇质量分数为50%，冷藏12小时，取上清液，过滤，回收乙醇。本工艺稳定、可行、收率高。本工艺稳定、可行、收率高。
关键词：经舒宁颗粒；提取；工艺
经舒宁颗粒由桃仁、红花、当归、川芎、川牛膝、黄芪、甘草组成。红花为主要成分之一。红花具有活血通经，散淤止痛的功效，用于闭经，痛经，恶露不行，跌扑损伤，疮疡肿痛等。《开宝本草》记载“：主产后血运口噤，腹内恶血不尽、绞痛，胎死腹中，并酒煮服。亦主蛊毒下血。”红花及其主要成分羟基红花黄色素A具有抗脑缺血、抗心肌损伤、抗血栓、抗氧化、抗肿瘤等作用[1-5]。本实验以羟基红花黄色素A为指标对经舒宁颗粒提取和醇沉工艺进行研究。
1 仪器与试药
ELGA PURELAB Ultra实验室超纯水系统（天津市劳尔科技有限公司）；800LX 台下式实验室清洗机（洁定贸易（上海）有限公司）；XP204分析天平（北京联博永通科技有限公司）；声彦SCQ-1000B超声波提取仪（上海声彦超声波仪器有限公司）；UV2900紫外可见分光光度计（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；WATERS 2489高效液相色谱仪（广州逸海科技有限公司）。羟基红花黄色素A对照品（中国药品生物制品检定所提供）。乙腈（济南英出化工科技有限公司）；乙醇（济南英出化工科技有限公司）；磷酸（广州市新易化工有限公司）；甲醇（广州市新易化工有限公司）。
2 方法与结果
2.1 单因素考察
2.1.1 提取次数
按处方称取药材，粉碎为20目，至于圆底烧瓶内，分别提取三次，第一次加10倍纯化水，回流提取40分钟，过滤，滤液，减压浓缩；第二次加10倍纯化水，回流提取40分钟，连续提取两次，过滤，合并滤液，减压浓缩；第三次加10倍纯化水，回流提取40分钟，连续提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中羟基红花黄色素A含量并计算羟基红花黄色素A收率。
2.1.2 加水倍数
按处方称取药材，粉碎为20目，至于圆底烧瓶内，分别提取四次，第一次加14倍纯化水，回流提取40分钟，连续两次，第二次加12倍纯化水，回流提取40分钟，连续两次，第三次加10倍纯化水，回流提取40分钟，连续两次，第四次加8倍纯化水，回流提取40分钟，连续两次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中羟基红花黄色素A含量并计算羟基红花黄色素A收率。
2.1.3 提取时间
按处方称取药材，粉碎为20目，至于圆底烧瓶内，分别提取三次，第一次加10倍纯化水，回流提取40分钟，连续两次，第二次加10倍纯化水，回流提取50分钟，连续两次，第三次加10倍纯化水，回流提取60分钟，连续两次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中羟基红花黄色素A含量并计算羟基红花黄色素A收率。
2.1.4 药液浓缩质量浓度
分别将滤液减压浓缩至质量浓度为1.10克/毫升、1.15克/毫升、1.20克/毫升、1.25克/毫升。待一次浓缩膏冷却，放至搅拌罐中，缓缓加入乙醇，边加边搅拌至均匀，使终点乙醇质量分数为50%，冷藏12小时，取上清液，过滤，回收乙醇。采用高效液相测定浓缩膏中羟基红花黄色素A含量并计算羟基红花黄色素A收率。
2.1.5 终点乙醇质量分数
将滤液减压浓缩至质量浓度为1.15克/毫升。待一次浓缩膏冷却，放至搅拌罐中，缓缓加入乙醇，边加边搅拌至均匀，分别使终点乙醇质量分数为30%、40%、50%、60%，冷藏12小时，取上清液，过滤，回收乙醇。采用高效液相测定浓缩膏中羟基红花黄色素A含量并计算羟基红花黄色素A收率。
2.2 正交试验设计
实验结果表明，提取时间对羟基红花黄色素A收率影响不大。提取两次和三次含量明显高于提取一次，提取两次和提取三次无明显差别，所以选择提取两次。加水倍数、药液浓缩质量浓度和终点乙醇质量分数对羟基红花黄色素A收率影响较大。选择加水倍数、药液浓缩质量浓度和终点乙醇质量分数作为考察因素，采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行优选。采用3个考察水平，用L9（34）正交表进行试验，因素水平表见表1。
3 含量测定方法
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为甲醇-乙腈-0.4%磷酸溶液（26：2：72）；检测波长为367nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按羟基红花黄色素A铵峰计算应不得低于2000。
4 实验结果
按照L9（34）正交设计表条件进行试验，得到最佳工艺为加10倍纯化水，回流提取40分钟，连续两次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩至质量浓度为1.15克/毫升。待一次浓缩膏冷却，放至搅拌罐中，缓缓加入乙醇，边加边搅拌至均匀，使终点乙醇质量分数为50%，冷藏12小时，取上清液，过滤，回收乙醇。本工艺稳定、可行、收率高。
参考文献
[1]韩海玲，孙玉芹，宋文刚，朱玉红，吕冬燕，朱艳彬，何海涛，姜欣.红花黄色素对内皮细胞增殖及凋亡的保护作用[J].中国实验诊断学，2011（1）.
[2]张庆，郑冬雁，徐红岩，潘燕，魏蜀一.红花黄素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用[J].山东大学学报（医学版），2011（6）.
[3]卜志勇，郑玲，李安军，施永彦.红花黄素对大鼠脊髓损伤局部SOD、MDA和细胞凋亡的影响[J].湖北医药学院学报，2011（1）.
[4]金鸣，裴崇强，臧宝霞，王麟.羟基红花黄色素A缓解血小板激活因子诱导的内皮细胞炎症因子表达升高作用的研究[J].心肺血管病杂志，2011（5）.
[5]靳宏光，姜琛，田宇丹.羟基红花黄色素A对兔动脉粥样硬化影响的实验研究[J].上海中医药杂志，2011（4）.
关键词：经舒宁颗粒；提取；工艺
经舒宁颗粒由桃仁、红花、当归、川芎、川牛膝、黄芪、甘草组成。红花为主要成分之一。红花具有活血通经，散淤止痛的功效，用于闭经，痛经，恶露不行，跌扑损伤，疮疡肿痛等。《开宝本草》记载“：主产后血运口噤，腹内恶血不尽、绞痛，胎死腹中，并酒煮服。亦主蛊毒下血。”红花及其主要成分羟基红花黄色素A具有抗脑缺血、抗心肌损伤、抗血栓、抗氧化、抗肿瘤等作用[1-5]。本实验以羟基红花黄色素A为指标对经舒宁颗粒提取和醇沉工艺进行研究。
1 仪器与试药
ELGA PURELAB Ultra实验室超纯水系统（天津市劳尔科技有限公司）；800LX 台下式实验室清洗机（洁定贸易（上海）有限公司）；XP204分析天平（北京联博永通科技有限公司）；声彦SCQ-1000B超声波提取仪（上海声彦超声波仪器有限公司）；UV2900紫外可见分光光度计（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；WATERS 2489高效液相色谱仪（广州逸海科技有限公司）。羟基红花黄色素A对照品（中国药品生物制品检定所提供）。乙腈（济南英出化工科技有限公司）；乙醇（济南英出化工科技有限公司）；磷酸（广州市新易化工有限公司）；甲醇（广州市新易化工有限公司）。
2 方法与结果
2.1 单因素考察
2.1.1 提取次数
按处方称取药材，粉碎为20目，至于圆底烧瓶内，分别提取三次，第一次加10倍纯化水，回流提取40分钟，过滤，滤液，减压浓缩；第二次加10倍纯化水，回流提取40分钟，连续提取两次，过滤，合并滤液，减压浓缩；第三次加10倍纯化水，回流提取40分钟，连续提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中羟基红花黄色素A含量并计算羟基红花黄色素A收率。
2.1.2 加水倍数
按处方称取药材，粉碎为20目，至于圆底烧瓶内，分别提取四次，第一次加14倍纯化水，回流提取40分钟，连续两次，第二次加12倍纯化水，回流提取40分钟，连续两次，第三次加10倍纯化水，回流提取40分钟，连续两次，第四次加8倍纯化水，回流提取40分钟，连续两次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中羟基红花黄色素A含量并计算羟基红花黄色素A收率。
2.1.3 提取时间
按处方称取药材，粉碎为20目，至于圆底烧瓶内，分别提取三次，第一次加10倍纯化水，回流提取40分钟，连续两次，第二次加10倍纯化水，回流提取50分钟，连续两次，第三次加10倍纯化水，回流提取60分钟，连续两次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中羟基红花黄色素A含量并计算羟基红花黄色素A收率。
2.1.4 药液浓缩质量浓度
分别将滤液减压浓缩至质量浓度为1.10克/毫升、1.15克/毫升、1.20克/毫升、1.25克/毫升。待一次浓缩膏冷却，放至搅拌罐中，缓缓加入乙醇，边加边搅拌至均匀，使终点乙醇质量分数为50%，冷藏12小时，取上清液，过滤，回收乙醇。采用高效液相测定浓缩膏中羟基红花黄色素A含量并计算羟基红花黄色素A收率。
2.1.5 终点乙醇质量分数
将滤液减压浓缩至质量浓度为1.15克/毫升。待一次浓缩膏冷却，放至搅拌罐中，缓缓加入乙醇，边加边搅拌至均匀，分别使终点乙醇质量分数为30%、40%、50%、60%，冷藏12小时，取上清液，过滤，回收乙醇。采用高效液相测定浓缩膏中羟基红花黄色素A含量并计算羟基红花黄色素A收率。
2.2 正交试验设计
实验结果表明，提取时间对羟基红花黄色素A收率影响不大。提取两次和三次含量明显高于提取一次，提取两次和提取三次无明显差别，所以选择提取两次。加水倍数、药液浓缩质量浓度和终点乙醇质量分数对羟基红花黄色素A收率影响较大。选择加水倍数、药液浓缩质量浓度和终点乙醇质量分数作为考察因素，采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行优选。采用3个考察水平，用L9（34）正交表进行试验，因素水平表见表1。
3 含量测定方法
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为甲醇-乙腈-0.4%磷酸溶液（26：2：72）；检测波长为367nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按羟基红花黄色素A铵峰计算应不得低于2000。
4 实验结果
按照L9（34）正交设计表条件进行试验，得到最佳工艺为加10倍纯化水，回流提取40分钟，连续两次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩至质量浓度为1.15克/毫升。待一次浓缩膏冷却，放至搅拌罐中，缓缓加入乙醇，边加边搅拌至均匀，使终点乙醇质量分数为50%，冷藏12小时，取上清液，过滤，回收乙醇。本工艺稳定、可行、收率高。
参考文献
[1]韩海玲，孙玉芹，宋文刚，朱玉红，吕冬燕，朱艳彬，何海涛，姜欣.红花黄色素对内皮细胞增殖及凋亡的保护作用[J].中国实验诊断学，2011（1）.
[2]张庆，郑冬雁，徐红岩，潘燕，魏蜀一.红花黄素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用[J].山东大学学报（医学版），2011（6）.
[3]卜志勇，郑玲，李安军，施永彦.红花黄素对大鼠脊髓损伤局部SOD、MDA和细胞凋亡的影响[J].湖北医药学院学报，2011（1）.
[4]金鸣，裴崇强，臧宝霞，王麟.羟基红花黄色素A缓解血小板激活因子诱导的内皮细胞炎症因子表达升高作用的研究[J].心肺血管病杂志，2011（5）.
[5]靳宏光，姜琛，田宇丹.羟基红花黄色素A对兔动脉粥样硬化影响的实验研究[J].上海中医药杂志，2011（4）.