【摘 要】
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为了鉴定并深入研究ORF9蛋白在猪圆环病毒2型感染中的作用，本研究制备了小鼠抗ORF9蛋白多克隆抗体并进行了初步应用。首先通过扩增克隆ORF9基因，构建原核表达质粒pET-32a（+）-PCV2-ORF9并转化至BL21（DE3）感受态细胞中，再利用SDS-PAGE对可能影响ORF9蛋白表达效果的因素（温度、IPTG浓度、时间）进行优化研究，随后将重组蛋白经纯化复性后免疫BALB/c小鼠制备多克隆
【基金项目】
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贵州省科技支撑计划项目（黔科合支撑[2021]一般162项目）；
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为了鉴定并深入研究ORF9蛋白在猪圆环病毒2型感染中的作用，本研究制备了小鼠抗ORF9蛋白多克隆抗体并进行了初步应用。首先通过扩增克隆ORF9基因，构建原核表达质粒pET-32a（+）-PCV2-ORF9并转化至BL21（DE3）感受态细胞中，再利用SDS-PAGE对可能影响ORF9蛋白表达效果的因素（温度、IPTG浓度、时间）进行优化研究，随后将重组蛋白经纯化复性后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，用ELISA法测定小鼠多抗效价，并用IFA和Western-blot方法对抗ORF9多克隆抗体特异性进行研究。结果显示，重组质粒pET-32a（+）-PCV2-ORF9构建成功；ORF9重组蛋白在IPTG为0.1 mmol/L、37 ℃条件下诱导4 h表达量最高，且主要以包涵体形式表达，分子量大小约24.2 ku；经ELISA方法检测制备的多抗效价为1：6 400；IFA和Western-blot试验结果均证明ORF9蛋白能被PCV2阳性血清和小鼠多克隆抗体特异性识别。本研究成功表达并纯化了具备抗原性PCV2 ORF9重组蛋白，制备的特异性抗PCV2 ORF9多克隆抗体为探究ORF9蛋白在PCV2感染中的作用奠定了基础材料。
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