【摘 要】
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目的 探讨硫酸吲哚酚(IS)诱导细胞质核苷酸结合寡聚化域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体通路激活与心肌细胞肥大蛋白表达的关系及可能机制.方法 提取原代心肌细胞,分为对照组和IS
【机 构】
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南方医科大学深圳医院心内科,广东深圳518101;佛山市三水区人民医院心内科;广州市妇女儿童医疗中心PICU;南方医科大学珠江医院心内科
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目的 探讨硫酸吲哚酚(IS)诱导细胞质核苷酸结合寡聚化域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体通路激活与心肌细胞肥大蛋白表达的关系及可能机制.方法 提取原代心肌细胞,分为对照组和IS(10 mmol/L)组,IS干预后检测两组脑钠肽蛋白表达情况.细胞计数套盒8(CCK8)法检测IS刺激小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)的最佳刺激浓度和时间.将RAW264.7分为对照组和IS组,Western blot检测NLRP3、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1前体(Pro-caspase1)、白细胞介素-1β(IL-1p)、IL-18蛋白表达情况.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测对照组和IS组细胞上清液中炎症因子IL-18和IL-1β水平.将巨噬细胞培养基上清液与心肌细胞直接共培养,分为空白对照组、巨噬细胞培养基组、巨噬细胞培养基+IS组,检测各组NLRP3、Pro-caspase 1、IL-1β、IL-18、脑钠肽蛋白表达情况.结果 IS刺激原代心肌细胞后,心房钠尿肽(ANP)和脑钠肽蛋白表达显著上调.由CCK8法检测发现IS刺激RAW264.7的最佳浓度是15 mmol/L,最佳干预时间为3 h.IS刺激RAW264.7后,与对照组相比炎症相关蛋白NLRP3、Pro-caspase1、1L-13、IL-18表达明显增加(均P＜0.05).通过ELISA法检测发现IS组巨噬细胞培养基上清液中炎症因子IL-1β和IL-18水平较对照组显著增加.在直接共培养实验中发现IS＋巨噬细胞培养基组与空白对照组和巨噬细胞培养基组相比,NLRP3、Pro-caspase 1、IL-1β、IL-18、ANP和脑钠肽蛋白表达显著上调(均P＜0.05).结论 IS可诱导NLRP3炎症小体活化,促进心肌细胞肥大蛋白表达.
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