采用NANOG短发夹RNA（shRNA）转染CD133+Eca-109食管鳞癌肿瘤干细胞，观察细胞增殖能力的变化，及NANOG对食管鳞癌干细胞的基因治疗效果。
方法采用无血清培养基悬浮培养法分离食管鳞癌干细胞并通过RT-PCR和Western-Blot法检测分选效果。采用针对NANOG不同mRNA序列的两个shRNA分别转染食管鳞癌干细胞设为sh-N1组和sh-N2组，同时将转染不针对任何mRNA序列的质粒设为对照NC组。采用RT-PCR和Western-Blot法检测细胞NANOG表达水平。采用CCK-8法检测细胞增殖能力。采用活死细胞染色检测细胞存活情况。采用无血清培养基悬浮培养并通过计数检测细胞成球能力。NANOG表达水平、CCK-8实验测得数据的比较采用单因素方差分析。
结果RT-PCR结果显示，正常培养的Eca-109食管鳞癌细胞CD133、CD44的表达水平1.03±0.02，1.02±0.02明显低于悬浮培养分离后肿瘤干细胞球中的表达10.12±0.19，9.21±0.26，（t = -79.952，-57.919；P均< 0.01）。Western-Blot方法检测所得CD133、CD44表达结果与RT-PCR一致。shRNA转染食管鳞癌干细胞后，CCK-8实验结果显示，sh-N1组和sh-N2组细胞于24、48、96 h测得的A值分别为（0.33 ± 0.02，0.52 ± 0.04，0.61 ± 0.04，0.81 ± 0.03），（0.33 ± 0.02，0.45 ± 0.04，0.53 ± 0.04，0.72 ± 0.07），较对照NC组（0.9±0.01，1.41±0.01，2.31±0.02，3.12±0.07）下调（F = 1121.33，525.73，1022.16，1198.29；P均< 0.01），但并未出现细胞凋亡；在无血清培养条件下，细胞球计数结果显示，sh-N1组和sh-N2组（12±1，16±2）细胞形成肿瘤干细胞球的能力较NC组（80±3）降低（P < 0.01）。
结论NANOG敲低对食管鳞癌干细胞的增殖具有明显的抑制效果，有望成为针对食管鳞癌的有效靶向性治疗手段。