【摘 要】
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目的:明确Sirt6对软骨细胞衰老的影响,探讨自噬在Sirt6抑制软骨细胞衰老中的作用。方法:体外培养SD大鼠膝关节软骨细胞,通过连续传代致软骨细胞衰老,β-半乳糖苷酶(β-gal)染
【机 构】
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温州医科大学附属第二医院育英儿童医院骨科,温州医科大学第二临床医学院
【基金项目】
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浙江省医药卫生科技计划项目(2014KYB158);浙江省大学生科技创新活动计划项目(2014R413021);浙江省自然科学基金资助项目(LY15H060008);温州市科技计划项目(Y20140152)
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目的:明确Sirt6对软骨细胞衰老的影响,探讨自噬在Sirt6抑制软骨细胞衰老中的作用。方法:体外培养SD大鼠膝关节软骨细胞,通过连续传代致软骨细胞衰老,β-半乳糖苷酶(β-gal)染色检测细胞衰老,Western blot检测Sirt6的蛋白表达变化。原代软骨细胞中借助慢病毒敲低Sirt6或过表达Sirt6,比较各组的最大传代次数及细胞衰老情况,通过q PCR比较二型胶原(Collagen-Ⅱ)、蛋白聚糖(Aggrecan)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及ADAMT-5的m RNA表达来探讨Sirt6对软骨细胞功能的影响。在软骨细胞中过表达Sirt6后通过免疫荧光染色观察细胞中自噬泡的变化,Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比例来探讨Sirt6对软骨细胞自噬的影响。在过表达Sirt6的同时通过使用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)来验证细胞自噬在Sirt6抑制软骨细胞衰老和功能退变中的作用。结果:连续体外培养软骨细胞,随着细胞传代次数的增加,Sirt6基因的表达量逐渐降低,原代软骨细胞中敲低Sirt6后,软骨细胞提前衰老,P16蛋白的表达量明显升高;软骨细胞中过表达Sirt6可以明显延缓细胞衰老;Sirt6可以促进软骨细胞自噬的发生;使用自噬抑制剂后可以明显抑制Sirt6对软骨细胞的保护作用。结论:提高Sirt6的表达水平可以延缓软骨细胞衰老及退变,且这种作用与Sirt6促进软骨细胞自噬相关。
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