【摘 要】
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采用逆转录-重组酶介导核酸扩增技术(Reverse Transcription Recombinase-aided amplification, RT-RAA)建立检测禽流感病毒H5N1的快速方法。根据禽流感病毒H5N1保守序列设计
【机 构】
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杭州国际旅行卫生保健中心(杭州海关口岸门诊部); 江苏奇天基因生物科技有限公司;
【基金项目】
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海关总署科研项目(2019HK139)
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采用逆转录-重组酶介导核酸扩增技术(Reverse Transcription Recombinase-aided amplification, RT-RAA)建立检测禽流感病毒H5N1的快速方法。根据禽流感病毒H5N1保守序列设计引物及探针,将H5N1 RNA逆转录为cDNA,然后以cDNA作模板,扩增检测病毒核酸序列。本研究构建了带有H5N1核酸序列的质粒,以此为模板检测不同浓度的质粒,分析该方法的灵敏度,对已知样本进行检测来验证方法的特异性。设计的H5N1特异性引物和探针,能在39℃恒温下,10～30 min可有效扩增出相应病毒的核酸,与其他流感病毒无交叉反应;对质粒的检测灵敏度可达10拷贝。建立的RT-RAA检测禽流感病毒H5N1方法灵敏度和特异性均较高,且该方法操作简单,适用于禽流感病毒H5N1的快速检测。
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