【摘 要】
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嗜热厌氧芽孢杆菌PDR2 (Anoxybacillus sp.PDR2)是一株极具潜力的偶氮染料降解菌,但目前对一种菌株中分离纯化两种具有不同催化活性的偶氮还原酶的相关研究还未见报道.从具有
【机 构】
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江西农业大学生物科学与工程学院,江西省农业微生物资源开发与利用工程实验室 南昌330045
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嗜热厌氧芽孢杆菌PDR2 (Anoxybacillus sp.PDR2)是一株极具潜力的偶氮染料降解菌,但目前对一种菌株中分离纯化两种具有不同催化活性的偶氮还原酶的相关研究还未见报道.从具有降解偶氮染料活性的嗜热厌氧芽孢杆菌的全基因组序列中,获得两种偶氮还原酶基因,将其命名为FMN和AZO,两种蛋白不具亲缘关系,但蛋白结构均属于α/β型结构.两种蛋白结构中的配体FMN可能为蛋白与底物结合提供电子和质子,且配体结构中异咯嗪环分子的关键原子N5分别与蛋白的Asn104和His75形成氢键,在稳定配体和蛋白活性可能起到重要作用,可作为研究蛋白与底物结合特异性的关键氨基酸.此外,采用原核表达技术成功将两种基因在大肠杆菌Escherichia coil BL21 (DE3)中表达.优化两种重组菌的诱导表达条件,AZO重组菌最佳诱导条件为添加诱导剂时菌体量OD600为0.8、诱导剂IPTG浓度为0.2 mmol/L、诱导时间24 h及诱导温度16℃,此时胞内重组酶降解甲基红的比酶活达到15.65 U/mg;FMN重组菌最佳诱导条件为添加诱导剂时菌体量OD600为0.8、诱导剂IPTG浓度为0.4 mmol/L、诱导时间10h及诱导温度20℃,此时胞内重组酶降解甲基红的比酶活达到18.66 U/mg.本研究表明优化两种偶氮还原酶原核表达条件能够显著提高酶活性,结合其蛋白结构特性可为后续蛋白纯化及分析蛋白质与底物结合特异性提供理论基础.
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