【摘 要】
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目的 分析黄芪多糖(AP)对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1的成骨分化作用机制.方法 MC3T3-E1细胞经成骨诱导后分别加入浓度为0、5、10μmol/L的AP进行干预,持续1、3、5、7 d后使用MTT法观察AP对细胞增殖的影响;干预14 d后,通过ALP及茜素红染色观察AP的促成骨分化作用;成骨相关mRNA表达水平经实时荧光定量PCR测定,其中包括Runt相关转录因子2(Runx2)、β-连环蛋白(β-catenin)、骨钙素(osteocalcin)、I型胶原蛋白(collagen I);并使用We
【机 构】
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南昌市洪都中医院骨伤七科,江西 南昌330008;南昌大学第二附属医院内分泌代谢科,江西 南昌330006
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目的 分析黄芪多糖(AP)对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1的成骨分化作用机制.方法 MC3T3-E1细胞经成骨诱导后分别加入浓度为0、5、10μmol/L的AP进行干预,持续1、3、5、7 d后使用MTT法观察AP对细胞增殖的影响;干预14 d后,通过ALP及茜素红染色观察AP的促成骨分化作用;成骨相关mRNA表达水平经实时荧光定量PCR测定,其中包括Runt相关转录因子2(Runx2)、β-连环蛋白(β-catenin)、骨钙素(osteocalcin)、I型胶原蛋白(collagen I);并使用Western blot法检测β-catenin、osteocalcin、Runx2蛋白表达水平,以及免疫荧光检测β-catenin的核易位情况.结果 加入5、10μmol/L的AP后可有效促进MC3T3-E1增殖,且药物浓度越高效果越明显;同时AP亦可提高ALP、茜素红染色的阳性率,以及 β-catenin、osteocalcin、Runx2、collagen I mRNA的表达水平(P<0.05);Western blot结果也显示AP可有效促进β-catenin、osteocalcin、Runx2蛋白表达(P<0.05),以及促进β-catenin入核.结论 AP可促进MC3T3-E1细胞增殖及成骨分化,机制可能涉及促进相关成骨标志物表达以及β-catenin入核.
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