环状RNA circ_MTHFD2对mircoRNA-124的调控在肺癌培美曲塞耐药中的作用

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目的探讨circMTHFD2调控microRNA-124(miR-124)的表达在肺癌培美曲塞耐药发生过程中的作用。方法采用高浓度反复间歇诱导法建立肺癌培美曲塞耐药细胞株A549/PEM。通过瘤内注射建立培美曲塞耐药的裸鼠移植瘤模型;采用Lipofectamine脂质体法将miR-124模拟物、miR-124抑制剂及阴性对照转染至A549和A549/PEM细胞,并分为miR-124上调组、miR-124抑制组及阴性对照组;采用CCK-8法和流式细胞术检测各组细胞的增殖及凋亡情况,比较各组细胞对培美曲塞的敏感性;采用实时荧光定量PCR(QPCR)和基因芯片检测miR-124和环状RNA的表达;通过测序技术检测耐药细胞及耐药裸鼠的肿瘤组织与对照组间环状RNA的表达,预测环状RNA上的miR-124结合位点。结果亲本细胞A549和耐药细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为(30.78±1.97)μmol/L和(913.53±14.1)μmol/L,最终获得耐药指数(RI)为29.69±1.49的培美曲塞耐药细胞,命名为A549/PEM。耐药细胞A549/PEM中miR-124的表达显著降低,相比A549细胞,下降约145.952倍;下调miR-124表达的A549细胞对培美曲塞敏感性降低,miR-124抑制组及阴性对照组细胞的IC50分别为(80.45±3.50)μmol/L和(9.94±1.90)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测显示miR-124表达上调可以显著诱导A549、A549/PEM细胞的凋亡;通过高通量测序提示在耐药的细胞及组织中环状RNA表达明显上调,表达量上调的circMTHFD2可与miR-124结合。结论 circMTHFD2可能通过调控miR-124的表达,参与肺癌培美曲塞耐药的发生发展。
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