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[摘 要]目的 建立清肺口服液的质量标准。方法 采用薄层色谱法鉴别制剂中葶苈子、黄芩和虎杖；采用高效液相色谱方法测定盐酸麻黄碱的含量。结果薄层鉴别能检出葶苈子、黄芩和虎杖的斑点，且斑点清晰。盐酸麻黄碱在16.41～525.0 μg/mL之间与峰面积呈良好线性关系，r=1.000，平均加样回收率为99.89%，RSD为1.42%。结论 该方法可用于清肺口服液的质量控制。
[关键词]清肺口服液；盐酸麻黄碱；薄层色谱法；高效液相色谱法
中图分类号：R97文献标识码：A文章编号：1009-914X（2013）21-0245-01
清肺口服液由麻黄、葶苈子、黄芩、虎杖等中药精制而成，具有宣肺开闭、清热解毒、化痰止咳之功效，主治小儿病毒性肺炎痰热闭肺证。麻黄为君药，主要含有麻黄碱、伪麻黄碱等生物碱类成分，其中麻黄碱含量较高，且为活性成分。为了更好地控制制剂的内在质量，本文建立了制剂中葶苈子、黄芩和虎杖的薄层鉴别方法及麻黄碱的HPLC含量测定方法。
1 仪器与试剂
美国Waters515泵，Waters 2487紫外可见检测器，Rheodyne 进样器，中科院大连化学物理所WDL 95色谱工作站；PBQ I型薄层自动涂布器；薄层层析显色加热器；硅胶G（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国Tedia公司）；水为重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。
盐酸麻黄碱对照品（批号171241 200303，HPLC法检查纯度大于99%）、黄芩苷对照品（批号110715 200212）、大黄素对照品（批号0757200206）、黄芩对照药材（批号120955 200406）均购自中国药品生物制品检定所。葶苈子药材经江苏省药检所鉴定为十字花科植物独行菜（Lepidium apetalum）的干燥成熟种子，习称“北葶苈子”；并标化后作为对照药材使用。清肺口服液（南京中医药大学研制，批号：050914，050915，050916）。
2 薄层鉴别
2.1 黄芩
取清肺口服液1 mL，加甲醇2mL，摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液。取缺黄芩陰性制剂1 mL，同法制成缺黄芩的阴性制剂溶液。另取黄芩苷对照品，用甲醇制成每1 mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。取黄芩对照药材1 g，加甲醇20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶液1 mL使溶解，即得，作为黄芩对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005版一部附录ⅥB）试验，吸取上述4种溶液各5μL，分别点于同一以含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯丁酮甲酸水（体积比5∶3∶1∶1）为展开剂，预平衡30 min，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同的暗绿色斑点；缺黄芩的阴性制剂无干扰。
2.2 虎杖
取清肺口服液10 mL，加2.5 mol/L硫酸溶液10 mL，水浴加热30 min，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次5 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取虎杖对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品、大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1 mL含各1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005版一部附录ⅥB）试验，吸取上述4种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60 ℃）甲酸乙酯甲酸（体积比15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。
3 含量测定
3.1 对照品溶液的制备
精密称取于五氧化二磷干燥器中干燥6 h的盐酸麻黄碱对照品适量，用流动相制成每1mL含01mg的溶液，即得。
3.2 供试品溶液的制备取清肺口服液5mL，置分液漏斗中，加5%（质量分数）氨水10mL，摇匀，用三氯甲烷振摇提取4次（10×2，5×2 mL）合并三氯甲烷液，用5%（质量分数）氨水5 mL洗涤以去除杂质，水层用三氯甲烷5 mL振摇提取1次，合并三氯甲烷液，用0.05 mol/L盐酸溶液振摇提取3次（10，5，5 mL），提取液置25 mL量瓶中，用10%（质量分数）氢氧化钠溶液调pH至4，加水稀释至刻度，即得。
3.3 色谱条件与系统适应性试验色谱柱
Lichrospher C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈水三乙胺磷酸（体积比5∶95∶0.05∶0.1）；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长：210 nm。理论塔板数按盐酸麻黄碱计算应不低于3 000。
3.4 线性关系考察
精密称取于60 ℃干燥至恒重的盐酸麻黄碱对照品10.50 mg，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成盐酸麻黄碱标准贮备液（1.050 mg/mL）。分别配成525.0、262.5、131.3、65.63、32.81、16.41？ μg/mL的系列对照品溶液，分别吸取上述溶液20μL，注入液相色谱仪，测定，以峰面积（A）为纵坐标，对照品质量浓度（ρ）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=2.098×104ρ-27 840.877，r=1.0000。表明盐酸麻黄碱在16.41～525.0 μg/mL之间与峰面积呈良好的线性关系。
3.5 空白试验原方去除麻黄药材，按制剂工艺制备缺麻黄的阴性制剂。取阴性制剂5 mL，置分液漏斗中，按含量测定方法分析，空白样品色谱在盐酸麻黄碱相应保留时间上没有干扰峰。
A.缺麻黄的阴性制剂； B.盐酸麻黄碱对照品；C.清肺口服液？ 1.盐酸麻黄碱
3.6 稳定性考察取同一批号（050914）制剂，每隔2 h进样1次，共测6次，结果峰面积RSD=0.67%，表明供试品溶液在12 h内稳定。
3.7 重复性试验 取同一批号（050914）制剂5份，分别按照供试品溶液制备方法制备，依法测定，盐酸麻黄碱的平均含量为0.426 1 mg/mL，RSD=1. 93%。
3.8 加样回收率试验 取已知盐酸麻黄碱含量的制剂样品（批号：050914，含量： 0.426 1 mg/mL），进行加样回收率试验。取本品2.5 mL，共6份，分别加入1.050 mg/mL盐酸麻黄碱对照液0.8、0.8、1.0、1.0、1.2、1.2 mL置分液漏斗中，按“3.2”项方法制备供试品溶液，依法测定，并计算盐酸麻黄碱回收率为99.54%，RSD=2.90%。
3.9 制剂样品测定 3批制剂样品，如法测定，根据外标一点法计算样品含量。
4 讨论
4.1 由于测定波长处于末端吸收附近，以乙腈 水系统为流动相，基线噪音较小，但由于麻黄碱为生物碱成分，需加入缓冲体系进行色谱分析，经试验研究表明，在乙腈水三乙胺磷酸（体积比5∶95∶0.05∶0.1）（pH3）的条件下，可使盐酸麻黄碱呈现良好分离。故选乙腈水三乙胺磷酸（体积比5∶95∶0. 05∶0.1）为流动相。
4.2 麻黄碱为清肺口服液的活性成分，可用来作为中成药的定量指标成分。
4.3 该方法简便可靠，精密度高，分离度好，可用于清肺口服液的含量测定和质量控制。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：化学工业出版社，2005：145.
[2] 李海鹰，李静.车前子与其伪品炒葶苈子的鉴别[J].基层医药杂志，2001，15（1）：36-37.
[关键词]清肺口服液；盐酸麻黄碱；薄层色谱法；高效液相色谱法
中图分类号：R97文献标识码：A文章编号：1009-914X（2013）21-0245-01
清肺口服液由麻黄、葶苈子、黄芩、虎杖等中药精制而成，具有宣肺开闭、清热解毒、化痰止咳之功效，主治小儿病毒性肺炎痰热闭肺证。麻黄为君药，主要含有麻黄碱、伪麻黄碱等生物碱类成分，其中麻黄碱含量较高，且为活性成分。为了更好地控制制剂的内在质量，本文建立了制剂中葶苈子、黄芩和虎杖的薄层鉴别方法及麻黄碱的HPLC含量测定方法。
1 仪器与试剂
美国Waters515泵，Waters 2487紫外可见检测器，Rheodyne 进样器，中科院大连化学物理所WDL 95色谱工作站；PBQ I型薄层自动涂布器；薄层层析显色加热器；硅胶G（青岛海洋化工集团）；乙醇、甲醇为色谱纯（美国Tedia公司）；水为重蒸馏水；其余试剂均为分析纯。
盐酸麻黄碱对照品（批号171241 200303，HPLC法检查纯度大于99%）、黄芩苷对照品（批号110715 200212）、大黄素对照品（批号0757200206）、黄芩对照药材（批号120955 200406）均购自中国药品生物制品检定所。葶苈子药材经江苏省药检所鉴定为十字花科植物独行菜（Lepidium apetalum）的干燥成熟种子，习称“北葶苈子”；并标化后作为对照药材使用。清肺口服液（南京中医药大学研制，批号：050914，050915，050916）。
2 薄层鉴别
2.1 黄芩
取清肺口服液1 mL，加甲醇2mL，摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液。取缺黄芩陰性制剂1 mL，同法制成缺黄芩的阴性制剂溶液。另取黄芩苷对照品，用甲醇制成每1 mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。取黄芩对照药材1 g，加甲醇20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶液1 mL使溶解，即得，作为黄芩对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005版一部附录ⅥB）试验，吸取上述4种溶液各5μL，分别点于同一以含4%醋酸钠的羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯丁酮甲酸水（体积比5∶3∶1∶1）为展开剂，预平衡30 min，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同的暗绿色斑点；缺黄芩的阴性制剂无干扰。
2.2 虎杖
取清肺口服液10 mL，加2.5 mol/L硫酸溶液10 mL，水浴加热30 min，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次5 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取虎杖对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品、大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1 mL含各1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2005版一部附录ⅥB）试验，吸取上述4种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60 ℃）甲酸乙酯甲酸（体积比15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。
3 含量测定
3.1 对照品溶液的制备
精密称取于五氧化二磷干燥器中干燥6 h的盐酸麻黄碱对照品适量，用流动相制成每1mL含01mg的溶液，即得。
3.2 供试品溶液的制备取清肺口服液5mL，置分液漏斗中，加5%（质量分数）氨水10mL，摇匀，用三氯甲烷振摇提取4次（10×2，5×2 mL）合并三氯甲烷液，用5%（质量分数）氨水5 mL洗涤以去除杂质，水层用三氯甲烷5 mL振摇提取1次，合并三氯甲烷液，用0.05 mol/L盐酸溶液振摇提取3次（10，5，5 mL），提取液置25 mL量瓶中，用10%（质量分数）氢氧化钠溶液调pH至4，加水稀释至刻度，即得。
3.3 色谱条件与系统适应性试验色谱柱
Lichrospher C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈水三乙胺磷酸（体积比5∶95∶0.05∶0.1）；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；检测波长：210 nm。理论塔板数按盐酸麻黄碱计算应不低于3 000。
3.4 线性关系考察
精密称取于60 ℃干燥至恒重的盐酸麻黄碱对照品10.50 mg，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成盐酸麻黄碱标准贮备液（1.050 mg/mL）。分别配成525.0、262.5、131.3、65.63、32.81、16.41？ μg/mL的系列对照品溶液，分别吸取上述溶液20μL，注入液相色谱仪，测定，以峰面积（A）为纵坐标，对照品质量浓度（ρ）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=2.098×104ρ-27 840.877，r=1.0000。表明盐酸麻黄碱在16.41～525.0 μg/mL之间与峰面积呈良好的线性关系。
3.5 空白试验原方去除麻黄药材，按制剂工艺制备缺麻黄的阴性制剂。取阴性制剂5 mL，置分液漏斗中，按含量测定方法分析，空白样品色谱在盐酸麻黄碱相应保留时间上没有干扰峰。
A.缺麻黄的阴性制剂； B.盐酸麻黄碱对照品；C.清肺口服液？ 1.盐酸麻黄碱
3.6 稳定性考察取同一批号（050914）制剂，每隔2 h进样1次，共测6次，结果峰面积RSD=0.67%，表明供试品溶液在12 h内稳定。
3.7 重复性试验 取同一批号（050914）制剂5份，分别按照供试品溶液制备方法制备，依法测定，盐酸麻黄碱的平均含量为0.426 1 mg/mL，RSD=1. 93%。
3.8 加样回收率试验 取已知盐酸麻黄碱含量的制剂样品（批号：050914，含量： 0.426 1 mg/mL），进行加样回收率试验。取本品2.5 mL，共6份，分别加入1.050 mg/mL盐酸麻黄碱对照液0.8、0.8、1.0、1.0、1.2、1.2 mL置分液漏斗中，按“3.2”项方法制备供试品溶液，依法测定，并计算盐酸麻黄碱回收率为99.54%，RSD=2.90%。
3.9 制剂样品测定 3批制剂样品，如法测定，根据外标一点法计算样品含量。
4 讨论
4.1 由于测定波长处于末端吸收附近，以乙腈 水系统为流动相，基线噪音较小，但由于麻黄碱为生物碱成分，需加入缓冲体系进行色谱分析，经试验研究表明，在乙腈水三乙胺磷酸（体积比5∶95∶0.05∶0.1）（pH3）的条件下，可使盐酸麻黄碱呈现良好分离。故选乙腈水三乙胺磷酸（体积比5∶95∶0. 05∶0.1）为流动相。
4.2 麻黄碱为清肺口服液的活性成分，可用来作为中成药的定量指标成分。
4.3 该方法简便可靠，精密度高，分离度好，可用于清肺口服液的含量测定和质量控制。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：化学工业出版社，2005：145.
[2] 李海鹰，李静.车前子与其伪品炒葶苈子的鉴别[J].基层医药杂志，2001，15（1）：36-37.