【摘 要】
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目的明确试剂和反应条件对荧光定量RT-PCR检测灵敏度的影响,为提高检测灵敏度提供指导。方法将3种荧光定量RT-PCR试剂(A、B、C)和3种推荐反应条件(a、b、c)组合成9种荧光定量
【基金项目】
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军队“十三五”重大项目(AWS16J020)
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目的明确试剂和反应条件对荧光定量RT-PCR检测灵敏度的影响,为提高检测灵敏度提供指导。方法将3种荧光定量RT-PCR试剂(A、B、C)和3种推荐反应条件(a、b、c)组合成9种荧光定量RT-PCR方法,采用统一的引物和探针,检测已知滴度的甲型流感病毒。通过对病毒进行10倍梯度稀释,测定不同方法的灵敏度,分析试剂、反应条件以及两者间相互作用对灵敏度的影响。结果采用试剂C的3种方法是检测灵敏度最低的方法(3种条件下灵敏度高于10~3PFU/ml),3种试剂都在与条件b组合时都达到灵敏度的最高值(试剂A、B、C分别达到10~0、10~0、10~3 PFU/ml),表明反应条件b可在一定程度提高方法的灵敏度。灵敏度最高的方法是试剂B和条件b组合。结论试剂和反应条件都对检测灵敏度有重要影响,但试剂的影响比反应条件更大;试剂和反应条件之间的相互作用对灵敏度也有一定影响。
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