论文部分内容阅读
目的
构建重组溶瘤病毒vvmIL33，靶向感染肿瘤细胞后能稳定分泌小鼠IL-33蛋白(mIL-33)，同时研究观察其对肿瘤的协同抑制作用。
方法采用PCR法扩增小鼠IL-33基因序列，将其插入真核表达载体中构建pCMS1-mIL33重组子；脂质体法将重组子导入已被亲本溶瘤病毒(vJS6)感染的细胞内，重组获得重组溶瘤病毒vvmIL33，经流式分选、纯化重组溶瘤病毒；酶联免疫吸附法(ELISA)检测vvmIL33感染肿瘤细胞后培养上清中mIL-33蛋白的含量；重组溶瘤病毒vvmIL33和亲本病毒vJS6分别感染肿瘤细胞，通过空斑形成试验和MTS试剂盒分别检测溶瘤病毒的复制能力及其对肿瘤细胞的溶解能力；经T细胞共培养实验观察vvmIL33感染肿瘤细胞后诱导T细胞的抗肿瘤能力。
结果重组子pCMS1-mIL33酶切电泳结果表明成功插入了mIL-33基因；与对照组相比，vvmIL33感染MC38细胞后能高剂量稳定分泌mIL-33蛋白；空斑形成试验结果显示vvmIL33或vJS6感染CV1、MC38细胞在各个时间点产生相似量的病毒，差异无统计学意义(P>0.05)；不同感染复数下(MOI)，vvmIL33感染后对肿瘤细胞的溶解能力与vJS6相似，差异无统计学意义(P>0.05)；经T细胞共培养实验后发现，相比较vJS6组，vvmIL33感染MC38细胞组中T细胞所产生的INF-γ蛋白浓度明显升高(P<0.05)，同时诱导T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用也明显增强(P<0.05)。
结论成功构建了重组溶瘤病毒vvmIL33，mIL-33的表达不损害溶瘤病毒的复制能力和诱导杀肿瘤细胞溶解的能力，溶瘤病毒搭载mIL-33增强了T细胞的免疫效应，增加了抗肿瘤作用。