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目的：构建结核分枝杆菌复活促进因子B（RpfB）的原核表达质粒，并在大肠杆菌中表达和纯化。方法：采用聚合酶链反应（PCR）方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfB基因（1089bp），然后用双内切酶消化后，与同样酶消化的pET32a（＋）载体连接，转入大肠杆菌Top10；阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。测序正确后，将重组质粒转化到的大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导，由T7启动子调控表达了RpfB蛋白；利用Westem-blot法对表达蛋白进行鉴定，最后对目的蛋白进行纯化。结果：双酶切鉴定