【摘 要】
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目的采用SYBR Green Ⅰ荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测人类白细胞抗原-B27(HLA-B27).方法对56例风湿科门诊及住院怀疑为强直性脊柱炎(AS)的患者,以HLA-B27的特异引物和内
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目的采用SYBR Green Ⅰ荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测人类白细胞抗原-B27(HLA-B27).方法对56例风湿科门诊及住院怀疑为强直性脊柱炎(AS)的患者,以HLA-B27的特异引物和内对照β-Globin引物对标本DNA分别进行常规PCR和SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测,并对HLA-B27阳性DNA进行不同倍数稀释后用两种方法进行检测比较.结果常规PCR检测HLA-B27阳性的样本上具有136 bp的条带,所有的阴性和阳性样本都有268 bp的β-Globin条带,共有30例患者HLA-B27阳性.SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测结果显示,阴性标本的熔解曲线图上(86.3±0.5)℃处有β-Globin的Tm峰,HLA-B27阳性的样本在熔解曲线上有(90.2±0.6)℃HLA-B27的Tm峰.两种方法结果符合率达100%.即使1:100稀释的DNA也可用SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测出结果,而常规PCR只有用原倍DNA才能检测出结果.结论SYBR Green Ⅰ荧光PCR法快速、准确、敏感、实时、简单和环保的特点是常规PCR法所没有的,完全能够替代常规PCR法,成为检测HLA-B27的新手段.
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