【摘 要】
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为建立一种同步检测鸡源细菌中5种四环素耐药基因tetA、tetD、tetG、tetS和tetX的多重聚合酶链式反应(PCR)方法,优化了多重PCR体系的引物和Taq DNA聚合酶浓度及退火温度等参
【机 构】
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上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所,上海理工大学医疗器械与食品学院,上海市设施园艺技术重点实验室
【基金项目】
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上海市科技兴农重点攻关项目(应用基础类)(编号:沪农科攻字(2014)第7-3-6号),国家自然科学基金青年科学基金项目(编号:31401599),上海市青年科技英才扬帆计划项目(编号:14YF1413000).
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为建立一种同步检测鸡源细菌中5种四环素耐药基因tetA、tetD、tetG、tetS和tetX的多重聚合酶链式反应(PCR)方法,优化了多重PCR体系的引物和Taq DNA聚合酶浓度及退火温度等参数,并考察了方法的灵敏度、特异性和适用性。建立的多重PCR反应技术的最佳反应体系为:混合DNA模板5μL,Taq酶1μL,tetA和tetX的正反向引物各0.5μL,tetG、tetD和tetS的正反向引物各1.0μL,dNTP4μL,MgCl24μL,10×PCR反应缓冲液5μL,最终用dd H2O补
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