沙眼衣原体CT703蛋白原核表达及免疫原性鉴定

来源 :中国皮肤性病学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tomotar
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目的构建沙眼衣原体CT703原核表达质粒pGEX/CT703,在大肠杆菌BL21中表达CT703蛋白,并鉴定其免疫原性。方法从沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)L2血清型基因组中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出全长CT703基因,亚克隆到原核表达载体pGEX中。重组质粒经酶切和测序鉴定后,转化到E.coli BL21感受态细胞中,IPTG诱导融合蛋白表达。融合蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,ELISA和Western blot实验检测CT703蛋白的免疫原性及免疫反应性。结果经酶切和测序鉴定,成功构建了原核重组表达质粒pGEX/CT703,IPTG诱导后,表达出相对分子量81kD的融合蛋白,Western blot检测免疫小鼠血清能与CT703蛋白特异性结合,ELISA检测免疫小鼠的血清效价为1:32000。结论 CT703蛋白在大肠杆菌BL21中能有效表达,并具有较好的免疫原性。
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