【摘 要】
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目的 构建N-端规则泛素E3连接酶UBR2过表达载体,并检测它在HepG2细胞中的过表达效率.方法 通过提取HepG2细胞总RNA, RT-PCR扩增UBR2基因片段,插入到pEGFP-N2载体中,构建真核
【机 构】
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云南省第一人民医院(昆明理工大学附属医院) 昆明市,650032
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目的 构建N-端规则泛素E3连接酶UBR2过表达载体,并检测它在HepG2细胞中的过表达效率.方法 通过提取HepG2细胞总RNA, RT-PCR扩增UBR2基因片段,插入到pEGFP-N2载体中,构建真核表达载体pEGFP-N2-UBR2,并转染HepG2细胞,转染后利用荧光显微镜,Western印迹检测UBR2的表达情况.结果 经双酶切和测序鉴定真核表达质粒pEGFP-N2-UBR2构建正确;转染后24 h,利用荧光显微镜观察,在转染pEGFP-N2-UBR2的HepG2细胞中观察到绿色荧光蛋白,在蛋白水平可以检测到UBR2蛋白过表达.结论 成功构建pEGFP-N2-UBR2过表达载体,并在HepG2细胞中验证其过表达效率.为今后研究其在细胞生长和增殖过程中的作用奠定基础.
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