绿色木霉葡聚糖内切酶EGⅢ基因在大肠杆菌中的表达、定点突变及其动力学特性的研究

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【摘要】

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将绿色木霉葡聚糖内切酶EGⅢ基因亚克隆到表达载体pET-22b（＋），构建重组质粒pET-egl3，转化到大肠杆菌BL21（DE3）。利用金属亲和层析对重组EGⅢ进行纯化，纯化后酶比活力达到6u／mg蛋白，最适

【作者】

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黄艳燕左文朴秦国梅韦宇拓杜丽琴庞宗文黄日波

【机构】

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广西大学生命科学与技术学院,广西科学院

【出处】

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工业微生物

【发表日期】

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2009年5期

【关键词】

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绿色木霉葡聚糖内切酶Ⅲ 大肠杆菌定点饱和突变 Trichoderma viride endoglucanase E. coil site-satu

【基金项目】

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国家自然科学基金项目（20666002）,广西科技攻关项目（桂科攻0537012）联合资助.

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将绿色木霉葡聚糖内切酶EGⅢ基因亚克隆到表达载体pET-22b（＋），构建重组质粒pET-egl3，转化到大肠杆菌BL21（DE3）。利用金属亲和层析对重组EGⅢ进行纯化，纯化后酶比活力达到6u／mg蛋白，最适反应温度为60℃，最适pH为4．0。同时对EGⅢ催化区的氨基酸残基R130和E218进行定点饱和突变，各筛选到一株酶活有提高的突变子R130P和E218F，其比活力为野生型EGⅢ的2．8倍和3．45倍。突变酶E218F的Km提高了一倍，催化效率Kcat提高了5．4倍；而R130P的Km和Kcat没有

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