从江香猪PHKG1和PHKG2基因克隆及其mRNA在组织中表达水平

来源 :农业生物技术学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:along14702
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磷酸化酶激酶γ1(phosphorylase kinase gamma1,PHKG1)和磷酸化酶激酶γ2(phosphorylase kinase gamma 2,PHKG2)基因是糖原代谢途径中的重要基因,具有分解糖原为机体肌肉收缩提供能量以及维持血糖平衡的功能。本研究为了对PHKG1和PHKG2基因的遗传机理进行探究,实验以贵州从江香猪(Sus scrofa)和大白猪为研究对象,利用T-A克隆的方法获取贵州从江香猪和大白猪PHKG1(Gen Bank:NM001293144.1)、PHKG2(Gen Bank:NM001166317)基因编码区序列,并比较2者CDS区序列差异,利用生物信息学软件预测2个基因的蛋白理化特性和功能等;同时采用实时荧光定量PCR技术分析PHKG1和PHKG2基因在贵州从江香猪和大白猪不同组织中表达差异。结果表明,从江香猪PHKG1基因CDS区全序列长1 167 bp,共编码388个氨基酸,PHKG2基因CDS区全序列长1 221 bp,共编码406个氨基酸,二者均构成具有STKc结构域的跨膜亲水性非分泌蛋白。对PHKG1和PHKG2蛋白结构预测以及进化树聚类分析表明这2个蛋白具有一定的同源性。并发现PHKG1基因存在4个突变位点,分别为A371G、A525G、T945C和C1050T,但是与大白猪相比存在T945C一处突变,均未引起氨基酸的改变,为同义突变;将从江香猪、大白猪、Gen Bank猪序列(NM001166317)、巴马香猪(KJ 186785)PHKG2基因序列分析比较发现,G236A、C431T、A726G、A807G、A816G和A867G为大白猪、从江香猪、巴马香猪共有的突变,从江香猪存在A614G特殊的突变位点,并且引起了第205位谷氨酸变成了丙氨酸。q RT-PCR结果显示,PHKG1基因在2个猪品种中均能检测到表达,在背最长肌中表达量最高,在肺脏中大白猪的表达量显著高于从江香猪(P<0.05);PHKG2基因在从江香猪和大白猪的脾、肺、大肠、小肠中的相对表达量都较高,而在心和背最长肌中的表达量较低。本研究为PHKG1和PHKG2基因后续真核表达的研究提供了理论依据。
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