探讨FLOT1基因小干扰RNA(siRNA)联合姜黄素对肾癌细胞凋亡的影响及其机制。
方法以Lipofectamine™ 2000为载体，将FLOT1-siRNA转染人肾癌786-0细胞，Western blot检测转染siRNA后的细胞中FLOT1的蛋白表达。后续研究分FLOT1-siRNA组、姜黄素组和FLOT1-siRNA＋姜黄素组进行细胞干预，并设置空白对照组，细胞计数试剂盒(CCK-8)及流式细胞仪分别检测4组细胞活力及凋亡率；H2DCFHDA探针检测4组细胞ROS含量；Western blot检测4组细胞磷酸化信号转导与转录激活因子-3(p-STAT3)及信号转导与转录激活因子-3(STAT3)信号通路下游增殖细胞核抗原(PCNA)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)的蛋白表达。
结果FLOT1-siRNA转染786-0细胞后FLOT1的表达(0.087±0.010)明显受到抑制，与空白对照组(0.454±0.038)比较差异有统计学意义(t＝16.177，P＝0.000)。si-FLOT1(0.491±0.053)或姜黄素(0.542±0.058)均可抑制786-0细胞活力，诱导786-0细胞凋亡(18.22±1.07)%、(12.39±0.86)%及ROS产生(189.5±8.2)、(147.7±7.1)，下调p-STAT3(0.118±0.014)、(0.110±0.012)和PCNA(0.229±0.025)、(0.302±0.034)表达，上调bax(0.206±0.021)、(0.123±0.014)表达，与NC组比较差异均有统计学意义(0.792±0.065)、(1.62±0.25)%、(57.7±3.5)、(0.202±0.023)、(0.577±0.049)、(0.069±0.010)(t＝6.736、7.378、12.796、10.112、7.186、2.832，P＝0.000、0.000、0.000、0.000、0.000、0.022)，联合使用si-FLOT1和姜黄素对786-0细胞活力(0.378±0.044)抑制、细胞凋亡(24.18±1.22)%及ROS产生(249.3±9.4)诱导、p-STAT3(0.054±0.008)和PCNA表达(0.135±0.016)下调及bax表达(0.411±0.038)上调作用更明显，且与单一的si-FLOT1或姜黄素比较差异均有统计学意义(t＝5.132、4.491、3.456、6.140、10.752、15.106，P＝0.001、0.002、0.009、0.000、0.000、0.000)。
结论FLOT1 siRNA或姜黄素均可抑制肾癌细胞活力，诱导细胞凋亡，两者合用对细胞活力及凋亡作用更明显，机制可能与细胞内ROS提高及抑制STAT3信号有关。