论文部分内容阅读
目的
研究敲低NPHP1基因表达对肾小管上皮细胞特性的影响。
方法靶向siRNA干扰技术敲低犬肾集合管上皮细胞（MDCK细胞）NPHP1的表达。实验分为空白对照组、阴性对照组、siRNA干扰组。显微镜下观察细胞形态和迁移能力；实时定量PCR和明胶酶谱法分别检测基质金属蛋白酶2和9（MMP2、MMP9）的mRNA表达和酶活性；实时定量PCR、Western印迹和细胞免疫荧光检测上皮钙黏素（E-cadherin）、β联蛋白（β-catenin）、闭锁小带蛋白1（ZO-1）、ZO-1相关核酸结合蛋白（ZONAB）及成纤维细胞标志蛋白α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达和分布。
结果与对照组比较，靶向siRNA干扰24 h，MDCK细胞迁移能力增强，E-cadherin、β-catenin、ZO-1的mRNA表达下降（均P<0.01），α-SMA、MMP2、MMP9及ZONAB的mRNA表达均升高（均P<0.05）；干扰48 h见细胞变梭长形，E-cadherin、β-catenin、ZO-1的蛋白表达均下降（均P<0.01），ZONAB、α-SMA蛋白表达升高（均P<0.05），MMP2、MMP9活性升高（均P<0.01）；干扰72 h，可见细胞膜上β-catenin、E-cadherin表达明显减少，呈现断续改变或完全缺失，部分细胞可见α-SMA表达，ZONAB在细胞质和细胞核显著表达。
结论敲低NPHP1表达可诱导MDCK细胞发生上皮间质转分化，激活ZO-1/ZONAB信号通路。这些改变可能与Ⅰ型肾单位肾痨肾间质纤维化发生有关。