【摘 要】
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目的 制备朊蛋白N端和C端多肽特异性抗体,并对ELISA方法在朊病毒病检测中的应用进行研究.方法 构建人朊蛋白N端和C端多肽原核表达重组质粒,分别表达纯化融合蛋白.以此为抗原
【机 构】
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西安交通大学医学院,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
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目的 制备朊蛋白N端和C端多肽特异性抗体,并对ELISA方法在朊病毒病检测中的应用进行研究.方法 构建人朊蛋白N端和C端多肽原核表达重组质粒,分别表达纯化融合蛋白.以此为抗原制备朊蛋白N端和C端多肽特异性抗体.ELISA和Western Blot检测所制备抗体与重组和天然的PrP蛋白的免疫反应性.初步建立间接ELISA检测技术.结果 所制备的N端和C端抗体可特异性识别重组全长PrP蛋白和相应的PrP片段,无明显交叉反应.C端抗体还可有效地识别感染羊瘙痒因子263K的仓鼠脑组织中经PK消化后的PrPSc,其Western Blot反应带型与PrP单抗3F4相似.5000 r/min离心处理脑组织悬液可有效保留上清中PrPSc成分而不影响ELISA检测.蛋白酶K虽经灭活处理,但可明显抑制重组和天然PrP在液相中与相应抗体的结合.间接ELISA方法可根据反应A值区分正常或感染动物样本.结论 所制备的朊蛋白N端和C端抗体具有良好的特异性,C端抗体可用于实验性朊病毒病的检测.建立的间接ELISA方法可试用于朊病毒病的初步筛查.
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