【摘 要】
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为了实现利用生物酶转化法生产D-对羟基苯甘氨酸,以工程菌E.coli BL21/pMD-T7-dht细胞作酶源,对底物对羟基苯海因到中间体N-氨基甲酰-D-对羟基苯甘氨酸的酶转化条件进行了优
【机 构】
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中国药科大学生物化学研究室,南京,210009
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为了实现利用生物酶转化法生产D-对羟基苯甘氨酸,以工程菌E.coli BL21/pMD-T7-dht细胞作酶源,对底物对羟基苯海因到中间体N-氨基甲酰-D-对羟基苯甘氨酸的酶转化条件进行了优化.酶转化的最适温度为37℃,最适pH为9.0.在Tris-HCl、磷酸盐、碳酸盐和硼酸盐4种缓冲体系中,底物对羟基苯海因的转化率相近.菌体细胞经适当冻融后,底物对羟基苯海因的转化率被提高.水溶性有机溶剂DMSF、DMF和Tween-80使对羟基苯海因的转化率降低.转化时底物和菌体的合适比例为30g/L对羟基苯海因和10g/L湿菌体.经工程菌E.coli BL21/pMD-T7-dht细胞催化,底物的转化率在13 h内可达到96%.所制备的产物熔点、旋光性和红外光谱等与标准品一致.
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