探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)促进胰腺癌细胞SW1990、PaTu8988和BxPC3凋亡的机制。
方法将携带TRAIL基因的pCA13质粒分别转染胰腺癌SW1990、PaTu8988和BxPC3细胞(pCA13-TRAIL组),以空质粒转染作为对照组(pCA13组)。采用RT-PCR及蛋白质免疫印迹法检测转染细胞TRAIL mRNA和蛋白的表达。流式细胞仪检测转染细胞的凋亡率和TRAIL受体R1、R2的表达,TUNEL和Hoechst双染色法及透射电镜观察细胞凋亡,免疫组织化学法检测转染细胞caspase-3蛋白的表达。
结果SW1990、PaTu8988和BxPC3细胞转染pCA13-TRAIL 24 h即有TRAIL mRNA和蛋白的表达;转染后24 h细胞的凋亡率分别为(27.30±5.14)%、(13.52±0.95)%和(31.40±8.70)%,均显著高于相应pCA13组的(10.58±1.88)%、(8.42±0.46)%和(16.11±1.66)%;转染后48 h TRAIL-R1阳性表达率分别为(61.37±3.05)%、(42.10±5.11)%和(36.64±4.84)%,TRAIL-R2阳性表达率分别为(36.20±4.83)%、(37.26±8.46)%和(24.32±3.71)%,除PaTu8988细胞,均显著高于相应的pCA13组;caspase-3阳性率分别为(14.64±5.35)%、(9.92±5.50)%和(16.12±6.74)%,显著高于pCA13组的(3.01±1.50)%、(1.75±0.50)%和(3.79±1.58)%,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。
结论TRAIL在体外可通过上调多株胰腺癌细胞TRAIL-R1、R2的表达从而促进其凋亡。