【摘 要】
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根据GenBank中已发布的血清3型鸭甲型肝炎病毒（DHAV-3）基因序列,针对VP1基因序列的保守区域设计一对引物及一条特异性TaqMan探针建立了DHAV-3的TaqMan荧光定量检测方法（TaqMan RT-qPCR）。通过对反应条件和反应体系的优化,建立的TaqMan RT-qPCR方法在6.39×10~8～6.39×10~0拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,R2值为0.999。该方法能
【基金项目】
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国家重点研发计划项目（2017YFD0500804）； 江苏省农业科技自主创新资金项目（CX（17）3024）； 江苏现代农业（水禽）产业技术体系疾病防控创新团队（JATS[2018]222）；
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根据GenBank中已发布的血清3型鸭甲型肝炎病毒（DHAV-3）基因序列,针对VP1基因序列的保守区域设计一对引物及一条特异性TaqMan探针建立了DHAV-3的TaqMan荧光定量检测方法（TaqMan RT-qPCR）。通过对反应条件和反应体系的优化,建立的TaqMan RT-qPCR方法在6.39×10~8～6.39×10~0拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,R2值为0.999。该方法能特异地检测出DHAV-3,与血清1型鸭甲型肝炎病毒（DHAV-1）及其他常见鸭病病原无交叉反应,且组内和组间重复性试验变异系数均小于1%。用普通RT-PCR方法和建立的TaqMan RT-qPCR方法,对63份临床疑似鸭肝炎的肝组织样品进行检测,结果 RT-PCR方法检出DHAV-3的阳性率是34.92%（22/63）,TaqMan RT-qPCR方法检出的阳性率是41.27%（26/63）;对49份DHAV-3感染康复鸭的肛拭子样品进行检测,RT-PCR和TaqMan RT-qPCR方法检出阳性率分别为22.45%（11/49）和85.71%（42/49）;用TaqMan RT-qPCR方法和鸡胚半数致死量法(ELD50)对DHAV-3（SD70株）鸡胚病毒含量进行检测比较,两种方法检测结果呈正相关。结果表明所建立的TaqMan RT-qPCR检测方法特异性好,灵敏度高,为DHA-3快速诊断和流行病学调查提供技术手段。
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