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摘 要 目的：建立测定白癜风颗粒有效成分含量的方法。方法：采用HPLC对白癜风颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的含量进行测定。结果：补骨脂素在0．03126~0．15630μg具有良好的线性关系，异补骨脂素在0．03276~0．16380μg具有良好的线性关系，平均回收率为99．04%，RSD=1．50％(n=5)。结论：该方法灵敏、重现性好，适用于白癜风颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定。
关键词 白癜风颗粒 补骨脂素 异补骨脂素 高效液相色谱法
白癜风是一种皮肤色素脱失、呈现白色斑的皮肤病。据统计，我国约有3000万的白癜风患者。中医理论认为，白癜风虽长在外表，根却在脏腑。系因于情志不舒、气血不和、脉络阻滞不通、毛孔闭塞、肌肤失养所致。
白癜风的病因:主要是脏腑失和,肝郁失疏,血热、外受风温、湿热之邪停留在肌肤,导致气血失调,血不营养肌肤和七情内伤,风邪搏于肌表,日久湿热内蕴,阻遏气血津液在人体正常分布流通,促使肝肾不足,肌肤失养,毛窍因子闭塞死亡,气滞则形成白癜风。其病因与遗传,免疫功能异常,内分泌代谢功能紊乱,黑色素细胞自身破坏,氨酸、铜离子缺乏,精神紧张,微循环障碍,神经调节功能异常,外伤,化学物质、烈日曝晒等有密切联系。
中药白癜风颗粒临床上治疗白癜风的效果比较好。白癜风颗粒由补骨脂、黄芪、红花、当归、川芎等15味中药组成。具有益气行滞、活血解毒、利湿消斑，驱风止痒之功效，在本院皮肤科应用多年，证实对白癜风等疾病有效。为了控制白癜风颗粒的质量，保证临床用药效果，本实验建立了HPLC测定白癜风颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的方法。经方法学考察证实该方法特异性高，回收率和精密度好，结果满意。
仪器与试剂
Waters 600高效液相色谱仪；Waters[LL] 2487紫外、可见波长检测器；Breeze色谱工作站；十万分之一微量分析天平；补骨脂素对照品(110730-200309)和异补骨脂素对照品(0738-200108)购自中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯，白癜风颗粒由本院自制。
方法与结果
色谱条件1～2：色谱柱,ReliaSil．C18(4．6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇,水(47：53)；流速,1.0ml/min；检测波长,245nm；柱温室温，进样量μl。对照品溶液的制备：精密称取补骨脂素对照品10．42mg，异补骨脂素10．92mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1．5ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末约0．5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
阴性对照品溶液的制备：按处方制备取不含补骨脂药材的样品颗粒剂，按供试品溶液的制备方法制成相应的阴性样品溶液。线性关系考察：精密吸取补骨脂素与异补骨脂素混合对照品溶液2、4、6、8、10μl分别注入液相色谱仪，测定补骨脂素与异补骨脂素色谱峰面积。以补骨脂素与异补骨脂素的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=1．25×103+7．55×106x，r=0．9997。
结果表明，补骨脂素在0．031264~15630 μg具有良好的线性关系，异补骨脂素在0．03276~0．16380 μg具有良好的线性关系。
精密度实验：精密吸取同一供试品溶液(批号：050502)5μL，重复进样6次，分别计算补骨脂素和异补骨脂素的质量分数，结果其RSD分别为0．76％和1．29％。
稳定性试验：精密吸取对照品溶液5μL，分别于0、2、4、24、36小时测定峰面积，计算得补骨脂素和异补骨脂素峰面积的RSD分别为1．99％和1．62％，表明对照品补骨脂素和异补骨脂素在36小时稳定。
重现性实验：取样品，精密称定5份，制备供试品溶液，进样测定计算补骨脂素和异补骨脂素的质量分数，其RSD为0．59％。
回收率实验：采用加样回收法。取批号为050501的样品5份，每份0．25g，置具塞锥形瓶中，各精密加入补骨脂素和异补骨脂素混合对照品0．14mg，制备供试品溶液，进样，测定。结果补骨脂素和异补骨脂素平均加样回收率为99．04％，RSD为1．50％。
样品测定：取3批白癜风颗粒制备供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μL，进样，测定，结果见表1。根据结果，暂定本品以干燥品计，含补骨脂素和异补骨脂素总含量不得少于0．22mg／g。
讨 论
流动相的确定：本实验曾选择乙醇-水溶液系统，结果不太理想，补骨脂素和异补骨脂素的出峰区间有干扰，峰形欠佳。而采用本实验的色谱条件即甲醇-水系统，补骨脂素和异补骨脂素的峰形得到明显的改善，且干扰减少 。
参考文献
1 CHP（中国药典）.Vol I.2005
2 Song B S,Li H B,Shi H X .Determination of psoralen in shuanghuangshengxue Granule Chin Tradit Herb Drugs(中草药)，2000，31（2）：106-107
关键词 白癜风颗粒 补骨脂素 异补骨脂素 高效液相色谱法
白癜风是一种皮肤色素脱失、呈现白色斑的皮肤病。据统计，我国约有3000万的白癜风患者。中医理论认为，白癜风虽长在外表，根却在脏腑。系因于情志不舒、气血不和、脉络阻滞不通、毛孔闭塞、肌肤失养所致。
白癜风的病因:主要是脏腑失和,肝郁失疏,血热、外受风温、湿热之邪停留在肌肤,导致气血失调,血不营养肌肤和七情内伤,风邪搏于肌表,日久湿热内蕴,阻遏气血津液在人体正常分布流通,促使肝肾不足,肌肤失养,毛窍因子闭塞死亡,气滞则形成白癜风。其病因与遗传,免疫功能异常,内分泌代谢功能紊乱,黑色素细胞自身破坏,氨酸、铜离子缺乏,精神紧张,微循环障碍,神经调节功能异常,外伤,化学物质、烈日曝晒等有密切联系。
中药白癜风颗粒临床上治疗白癜风的效果比较好。白癜风颗粒由补骨脂、黄芪、红花、当归、川芎等15味中药组成。具有益气行滞、活血解毒、利湿消斑，驱风止痒之功效，在本院皮肤科应用多年，证实对白癜风等疾病有效。为了控制白癜风颗粒的质量，保证临床用药效果，本实验建立了HPLC测定白癜风颗粒中补骨脂素和异补骨脂素的方法。经方法学考察证实该方法特异性高，回收率和精密度好，结果满意。
仪器与试剂
Waters 600高效液相色谱仪；Waters[LL] 2487紫外、可见波长检测器；Breeze色谱工作站；十万分之一微量分析天平；补骨脂素对照品(110730-200309)和异补骨脂素对照品(0738-200108)购自中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯，白癜风颗粒由本院自制。
方法与结果
色谱条件1～2：色谱柱,ReliaSil．C18(4．6mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇,水(47：53)；流速,1.0ml/min；检测波长,245nm；柱温室温，进样量μl。对照品溶液的制备：精密称取补骨脂素对照品10．42mg，异补骨脂素10．92mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1．5ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末约0．5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
阴性对照品溶液的制备：按处方制备取不含补骨脂药材的样品颗粒剂，按供试品溶液的制备方法制成相应的阴性样品溶液。线性关系考察：精密吸取补骨脂素与异补骨脂素混合对照品溶液2、4、6、8、10μl分别注入液相色谱仪，测定补骨脂素与异补骨脂素色谱峰面积。以补骨脂素与异补骨脂素的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=1．25×103+7．55×106x，r=0．9997。
结果表明，补骨脂素在0．031264~15630 μg具有良好的线性关系，异补骨脂素在0．03276~0．16380 μg具有良好的线性关系。
精密度实验：精密吸取同一供试品溶液(批号：050502)5μL，重复进样6次，分别计算补骨脂素和异补骨脂素的质量分数，结果其RSD分别为0．76％和1．29％。
稳定性试验：精密吸取对照品溶液5μL，分别于0、2、4、24、36小时测定峰面积，计算得补骨脂素和异补骨脂素峰面积的RSD分别为1．99％和1．62％，表明对照品补骨脂素和异补骨脂素在36小时稳定。
重现性实验：取样品，精密称定5份，制备供试品溶液，进样测定计算补骨脂素和异补骨脂素的质量分数，其RSD为0．59％。
回收率实验：采用加样回收法。取批号为050501的样品5份，每份0．25g，置具塞锥形瓶中，各精密加入补骨脂素和异补骨脂素混合对照品0．14mg，制备供试品溶液，进样，测定。结果补骨脂素和异补骨脂素平均加样回收率为99．04％，RSD为1．50％。
样品测定：取3批白癜风颗粒制备供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μL，进样，测定，结果见表1。根据结果，暂定本品以干燥品计，含补骨脂素和异补骨脂素总含量不得少于0．22mg／g。
讨 论
流动相的确定：本实验曾选择乙醇-水溶液系统，结果不太理想，补骨脂素和异补骨脂素的出峰区间有干扰，峰形欠佳。而采用本实验的色谱条件即甲醇-水系统，补骨脂素和异补骨脂素的峰形得到明显的改善，且干扰减少 。
参考文献
1 CHP（中国药典）.Vol I.2005
2 Song B S,Li H B,Shi H X .Determination of psoralen in shuanghuangshengxue Granule Chin Tradit Herb Drugs(中草药)，2000，31（2）：106-107