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摘 要：2012年7月和8月份，我院监测了辽宁省灯塔市柳条寨李大仁村怀头鲶养殖户的5个患有烂鳃病的池塘和3个未发病的池塘的水温、DO、pH、NH+4-N和NO-2-N含量；并采病鱼样品20尾，正常鱼样品6尾，用以探讨水环境与怀头鲶组织病理的关系。结果表明：当氨氮、亚硝酸盐氮分别超出正常养殖水体指标0.5mg/L和0.02mg/L时，并积累一段时间后，鳃小片呼吸上皮细胞增生、肿胀，鳃小片毛细血管扩张，充血。
关键词：水环境；怀头鲶；烂鳃病；组织病理
怀头鲶（Silurus soldatovi）别名黑龙江六须鲶、怀子鲶， 在鱼类分类上隶属于鲶形目（Siluriformes）、鲶科（Siluridae）、鲶属（Silurus），主要分布于我国的松花江、乌苏里江、嫩江等江河，是黑龙江地产鱼类，适应水环境能力较强。怀头鲶肉质细嫩，味道鲜美，生长速度快，起捕率高，容易饲养，因此其市场前景广阔。
近年来，由于淡水养殖业快速发展，管理问题的难度加大，我国部分省、市渔业地区相继爆发了怀头鲶烂鳃病，给我国的渔业生产者带来了极大的经济损失，因此受到水产工作者的密切关注。2016年7月起，辽宁省灯塔市柳条寨李大仁村发生人工养殖怀头鲶大面积死亡；为查明病因，本文从主要水环境因子对鱼体各组织功能影响方面进行了探究。
1 材料和方法
1.1 材料来源
2016年7月至2016年8月期间，分别对辽宁省灯塔市柳条寨李大仁村怀头鲶养殖户的5个患有烂鳃病的池塘和3个未发病的池塘进行了鱼体采样与水质监测。鱼体经过镜检，未发现寄生虫。
1.2 水质分析
氨态氮采用实验室Nessler法测定，亚硝酸态氮采用对氨基苯磺酸固体试剂分光光度计法测定，溶解氧采用碘量法测定[1]，pH值采用型号为梅特勒-托利多的FE20笔形pH计测定。
1.3 组织切片与观察
取发病池塘中患有烂鳃症状的怀头鲶以及未发病池塘中养殖健康的怀头鲶；经震荡其头部，使鱼体处于昏厥状态；再用清水冲洗，擦拭干净后取鱼体的鳃部组织块（1 cm×1 cm×1 cm），用新鲜配制的波恩氏液[2]固定48 h后，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡（55～60 ℃）包埋。
切片厚度6 μm，再进行苏木精-曙红（H.E）染色、中性树胶封片，最后用E-CLIPSE E600显微镜观察、拍照[3]。
1.4 数据分析与处理
实验描述结果均值用“平均值±标准差”表示，采用SPSS17.0在a=0.05水平下进行统计分析，数据经SPSS17.0的一维方差分析中List比较和单一样本t检验，进行显著性分析。
2 结果与分析
2.1 临床症状
从2016年7月起，辽宁省灯塔市柳条寨李大仁村养殖户的怀头鲶相继患有烂鳃病。发病池塘边可见部分浮于水面的怀头鲶，病鱼具有溜边、侧翻现象，并且游动缓慢。8月份起，发病池塘边可见大量浮于水面的怀头鲶，并见大量死鱼。怀头鲶患病率达70%以上，死亡率达20%以上。病鱼的最显著特征表现为鳃组织红肿、充血，黏液分泌增多，同时上边挂满泥土；活体解剖后发现肠内壁挂有淡黄色积液；病鱼体表发红，充血；肝脏肿大。
2.2 患病池塘与未患病池塘主要水环境因子结果分析
从表1可见7月份未患病池塘养殖水温26.0 ℃左右，溶解氧均值在8 mg/L左右，pH均值为8.0上下，偏弱碱性，氨氮值小于0.5，亚硝酸盐值小于0.02，这与淡水养殖水体的水化的指标相符。7月份患病池塘溶解氧均值在5 mg/L左右，氨氮经SPSS17.0的单一样本t检验，以淡水养殖水体正常值0.5为参考值，检验（P>0.05）呈不显著性差异。但均值大于正常淡水养殖水体值0.5，超出了正常养殖水体指标；患病池塘亚硝酸盐经SPSS17.0的单一样本t检验，以淡水养殖水体正常值0.02为参考值，检验（P>0.05）呈不显著性差异。但均值大于正常养殖水体值0.02，超出了正常养殖水体指标。
8月份未患病池塘养殖水温30.0℃左右，溶解氧均值在9 mg/L左右，pH均值变化不大，偏弱碱性，氨氮值小于0.5，亚硝酸盐值小于0.02，这符合淡水养殖水体的水化指标。8月份患病池塘溶解氧均值4 mg/L左右，pH值变化不大，患病池塘氨氮、亚硝酸盐经SPSS17.0的单一样本t检验，以淡水养殖水体正常值0.5和0.02为参考值，检验（P<0.05）均呈显著性差异。其均值分别大于淡水养殖水体正常值0.5和0.02，超出了正常养殖水体指标。
7、8月份同一患病池塘的氨氮、亚硝酸盐分别经过SPSS17.0一维方差分析中List比较，检验（P<0.05）均呈显著性差异；溶解氧经过SPSS17.0一维方差分析中List比較，检验（P>0.05）呈不显著性差异。未患病池塘测定的主要水环境指标值符合淡水养殖水体指标要求。
2.3 鳃组织显微病理变化
鳃与对照组比较（图1-1），病鱼鳃组织呼吸上皮细胞与相邻的鳃小片呼吸上皮细胞形成增生性融合，呈板状；并有许多炎性细胞浸润其中（图1-2）。部分鳃小片呼吸上皮细胞肿胀后，与毛细血管分离形成腔隙（图1-3）。局部鳃小片末端膨胀成棒球状，其间毛细血管扩张，充血（图1-4）。
3 讨论
患有烂鳃症状的病鱼，鳃组织红肿，黏液增多；从图Ⅰ-2、3、4观察可知，病鱼鳃小片上皮细胞肿胀、增生，其间毛细血管扩张，充血，并有炎性细胞浸润；病鱼8月份发病率和死亡率均高于7月份。从表1数据结果分析：7、8月份患病池塘中的氨氮、亚硝酸盐指标测定值均大于淡水养殖水体指标的正常值，而7、8月份氨氮、亚硝酸盐指标测定值显著大于7月份（P<0.05）指标测定值；同时7月份患病池塘溶解氧的指标测定值在淡水养殖水体指标的正常值5 mg/L左右， 8月份患病池塘溶解氧的指标测定值小于淡水养殖水体指标的正常值5 mg/L，两者均小于未患病池塘的溶解氧指标测定值。此外，通过表1数据可知，养殖水体pH值在8上下，呈弱碱性，这时水体中的氨氮主要以非离子态NH3-N的形式透过鳃组织的细胞膜；通过鳃细胞膜的NH3-N又以游离态NH4+-N进入鱼体血液中，其血液中的氨氮浓度随之升高，并在高氨浓度下，鱼体的血液输氧能力大幅下降，此时鱼体内多种活性酶受到抑制，又因为多余的废氮难以排除，最终导致氧气和废物交换不畅，从而破坏了鱼类鳃组织。再者，当亚硝酸盐浓度高于淡水养殖水体指标的正常值后，亚硝酸氮透过鳃组织细胞膜，并在血液中以游离态形式进入鱼体各组织细胞的细胞质内，阻断了其遗传物质的正常合成，细胞外间质的遗传物质遭到降解，最终导致细胞外间质消失[4]，进一步加剧了鱼体的发病率和死亡率。 病鱼肠内壁有淡黄色液体。由表1数据分析可知，7、8月份氨氮、亚硝酸盐指标测定值均高于淡水养殖水体指标值，这将使鱼体血液氨氮和亚硝酸盐浓度增高，从而导致了肠组织细胞外间质的降解，造成了腸组织上皮细胞的损坏；受损的组织成为某些细菌或病毒的营养源，进一步导致肠组织炎性细胞分泌增多，肠内壁挂有积液，肠组织功能性失调。氨氮、亚硝酸对肝脏的影响与对肠组织作用机理类似，肝组织受损最终导致肝脏分泌与合成功能受到影响[5-9]。
病鱼鱼体发红、充血。表1可知，患病池塘水温在26～31 ℃之间，溶解氧均值长期在5 mg/L左右，致使氨转化为硝酸盐过程受阻，亚硝酸盐在水中聚积；聚积的亚硝酸将血液中的血红蛋白转化为高铁血红蛋白，从而使血液失去了输送氧气的能力；进一步导致了鱼体血红细胞产生还原机制的障碍，进而发生细胞核破裂与细胞膜受损导致的溶血、鱼体发红症状。
4 小结
本文通过对患有怀头鲶烂鳃病池塘中水质的监测，来探讨主要水环境因子对怀头鲶烂鳃病的影响，并为怀头鲶在今后的生产实践防病过程提供一定的理论基础。
参考文献：
[1] 淡水养殖水化学[M].广西：广西科学技术出版社，1990：180-199
[2] 曹焯，陈茂生.组织实验指导[M].北京：北京大学出版社，1993：164
[3] 洪水根.动物显微技术学[M].厦门：厦门大学出版社，1989：141-153
[4] 张洁明，郭峰，柳凌.环境因子对鱼鳃细胞外间质的影响初探[J].淡水渔业，2004（5）：30-31
[5] Gaetke L M ，Chow C K.Copper toxicity，oxidative stress ，and an tioxidant nutrients[J].Toxicology，2003（189）：147-163
[6]Malatt J.Fish gill structural changes induced by toxicants and other irritants：A statistical review[J].Can J Fish Aquat Sci，1985（42）：630-648
[7] 宋振荣.水产动物病理学[M].厦门：集美大学出版社，2000（中册）：39-42
[8] 赵典惠，刘丽波，孙际佳等.用美人鱼弧菌与创伤弧菌人工感染卵形鲳鯵的组织病理学研究 [J].大连水产学院学报，2007，22（6）：455-459
[9] 刘振勇，谢友佺，林小金.大黄鱼肝脏病变组织病理学观察 [J].海洋水产研究，2007，28（5）：7-11
关键词：水环境；怀头鲶；烂鳃病；组织病理
怀头鲶（Silurus soldatovi）别名黑龙江六须鲶、怀子鲶， 在鱼类分类上隶属于鲶形目（Siluriformes）、鲶科（Siluridae）、鲶属（Silurus），主要分布于我国的松花江、乌苏里江、嫩江等江河，是黑龙江地产鱼类，适应水环境能力较强。怀头鲶肉质细嫩，味道鲜美，生长速度快，起捕率高，容易饲养，因此其市场前景广阔。
近年来，由于淡水养殖业快速发展，管理问题的难度加大，我国部分省、市渔业地区相继爆发了怀头鲶烂鳃病，给我国的渔业生产者带来了极大的经济损失，因此受到水产工作者的密切关注。2016年7月起，辽宁省灯塔市柳条寨李大仁村发生人工养殖怀头鲶大面积死亡；为查明病因，本文从主要水环境因子对鱼体各组织功能影响方面进行了探究。
1 材料和方法
1.1 材料来源
2016年7月至2016年8月期间，分别对辽宁省灯塔市柳条寨李大仁村怀头鲶养殖户的5个患有烂鳃病的池塘和3个未发病的池塘进行了鱼体采样与水质监测。鱼体经过镜检，未发现寄生虫。
1.2 水质分析
氨态氮采用实验室Nessler法测定，亚硝酸态氮采用对氨基苯磺酸固体试剂分光光度计法测定，溶解氧采用碘量法测定[1]，pH值采用型号为梅特勒-托利多的FE20笔形pH计测定。
1.3 组织切片与观察
取发病池塘中患有烂鳃症状的怀头鲶以及未发病池塘中养殖健康的怀头鲶；经震荡其头部，使鱼体处于昏厥状态；再用清水冲洗，擦拭干净后取鱼体的鳃部组织块（1 cm×1 cm×1 cm），用新鲜配制的波恩氏液[2]固定48 h后，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡（55～60 ℃）包埋。
切片厚度6 μm，再进行苏木精-曙红（H.E）染色、中性树胶封片，最后用E-CLIPSE E600显微镜观察、拍照[3]。
1.4 数据分析与处理
实验描述结果均值用“平均值±标准差”表示，采用SPSS17.0在a=0.05水平下进行统计分析，数据经SPSS17.0的一维方差分析中List比较和单一样本t检验，进行显著性分析。
2 结果与分析
2.1 临床症状
从2016年7月起，辽宁省灯塔市柳条寨李大仁村养殖户的怀头鲶相继患有烂鳃病。发病池塘边可见部分浮于水面的怀头鲶，病鱼具有溜边、侧翻现象，并且游动缓慢。8月份起，发病池塘边可见大量浮于水面的怀头鲶，并见大量死鱼。怀头鲶患病率达70%以上，死亡率达20%以上。病鱼的最显著特征表现为鳃组织红肿、充血，黏液分泌增多，同时上边挂满泥土；活体解剖后发现肠内壁挂有淡黄色积液；病鱼体表发红，充血；肝脏肿大。
2.2 患病池塘与未患病池塘主要水环境因子结果分析
从表1可见7月份未患病池塘养殖水温26.0 ℃左右，溶解氧均值在8 mg/L左右，pH均值为8.0上下，偏弱碱性，氨氮值小于0.5，亚硝酸盐值小于0.02，这与淡水养殖水体的水化的指标相符。7月份患病池塘溶解氧均值在5 mg/L左右，氨氮经SPSS17.0的单一样本t检验，以淡水养殖水体正常值0.5为参考值，检验（P>0.05）呈不显著性差异。但均值大于正常淡水养殖水体值0.5，超出了正常养殖水体指标；患病池塘亚硝酸盐经SPSS17.0的单一样本t检验，以淡水养殖水体正常值0.02为参考值，检验（P>0.05）呈不显著性差异。但均值大于正常养殖水体值0.02，超出了正常养殖水体指标。
8月份未患病池塘养殖水温30.0℃左右，溶解氧均值在9 mg/L左右，pH均值变化不大，偏弱碱性，氨氮值小于0.5，亚硝酸盐值小于0.02，这符合淡水养殖水体的水化指标。8月份患病池塘溶解氧均值4 mg/L左右，pH值变化不大，患病池塘氨氮、亚硝酸盐经SPSS17.0的单一样本t检验，以淡水养殖水体正常值0.5和0.02为参考值，检验（P<0.05）均呈显著性差异。其均值分别大于淡水养殖水体正常值0.5和0.02，超出了正常养殖水体指标。
7、8月份同一患病池塘的氨氮、亚硝酸盐分别经过SPSS17.0一维方差分析中List比较，检验（P<0.05）均呈显著性差异；溶解氧经过SPSS17.0一维方差分析中List比較，检验（P>0.05）呈不显著性差异。未患病池塘测定的主要水环境指标值符合淡水养殖水体指标要求。
2.3 鳃组织显微病理变化
鳃与对照组比较（图1-1），病鱼鳃组织呼吸上皮细胞与相邻的鳃小片呼吸上皮细胞形成增生性融合，呈板状；并有许多炎性细胞浸润其中（图1-2）。部分鳃小片呼吸上皮细胞肿胀后，与毛细血管分离形成腔隙（图1-3）。局部鳃小片末端膨胀成棒球状，其间毛细血管扩张，充血（图1-4）。
3 讨论
患有烂鳃症状的病鱼，鳃组织红肿，黏液增多；从图Ⅰ-2、3、4观察可知，病鱼鳃小片上皮细胞肿胀、增生，其间毛细血管扩张，充血，并有炎性细胞浸润；病鱼8月份发病率和死亡率均高于7月份。从表1数据结果分析：7、8月份患病池塘中的氨氮、亚硝酸盐指标测定值均大于淡水养殖水体指标的正常值，而7、8月份氨氮、亚硝酸盐指标测定值显著大于7月份（P<0.05）指标测定值；同时7月份患病池塘溶解氧的指标测定值在淡水养殖水体指标的正常值5 mg/L左右， 8月份患病池塘溶解氧的指标测定值小于淡水养殖水体指标的正常值5 mg/L，两者均小于未患病池塘的溶解氧指标测定值。此外，通过表1数据可知，养殖水体pH值在8上下，呈弱碱性，这时水体中的氨氮主要以非离子态NH3-N的形式透过鳃组织的细胞膜；通过鳃细胞膜的NH3-N又以游离态NH4+-N进入鱼体血液中，其血液中的氨氮浓度随之升高，并在高氨浓度下，鱼体的血液输氧能力大幅下降，此时鱼体内多种活性酶受到抑制，又因为多余的废氮难以排除，最终导致氧气和废物交换不畅，从而破坏了鱼类鳃组织。再者，当亚硝酸盐浓度高于淡水养殖水体指标的正常值后，亚硝酸氮透过鳃组织细胞膜，并在血液中以游离态形式进入鱼体各组织细胞的细胞质内，阻断了其遗传物质的正常合成，细胞外间质的遗传物质遭到降解，最终导致细胞外间质消失[4]，进一步加剧了鱼体的发病率和死亡率。 病鱼肠内壁有淡黄色液体。由表1数据分析可知，7、8月份氨氮、亚硝酸盐指标测定值均高于淡水养殖水体指标值，这将使鱼体血液氨氮和亚硝酸盐浓度增高，从而导致了肠组织细胞外间质的降解，造成了腸组织上皮细胞的损坏；受损的组织成为某些细菌或病毒的营养源，进一步导致肠组织炎性细胞分泌增多，肠内壁挂有积液，肠组织功能性失调。氨氮、亚硝酸对肝脏的影响与对肠组织作用机理类似，肝组织受损最终导致肝脏分泌与合成功能受到影响[5-9]。
病鱼鱼体发红、充血。表1可知，患病池塘水温在26～31 ℃之间，溶解氧均值长期在5 mg/L左右，致使氨转化为硝酸盐过程受阻，亚硝酸盐在水中聚积；聚积的亚硝酸将血液中的血红蛋白转化为高铁血红蛋白，从而使血液失去了输送氧气的能力；进一步导致了鱼体血红细胞产生还原机制的障碍，进而发生细胞核破裂与细胞膜受损导致的溶血、鱼体发红症状。
4 小结
本文通过对患有怀头鲶烂鳃病池塘中水质的监测，来探讨主要水环境因子对怀头鲶烂鳃病的影响，并为怀头鲶在今后的生产实践防病过程提供一定的理论基础。
参考文献：
[1] 淡水养殖水化学[M].广西：广西科学技术出版社，1990：180-199
[2] 曹焯，陈茂生.组织实验指导[M].北京：北京大学出版社，1993：164
[3] 洪水根.动物显微技术学[M].厦门：厦门大学出版社，1989：141-153
[4] 张洁明，郭峰，柳凌.环境因子对鱼鳃细胞外间质的影响初探[J].淡水渔业，2004（5）：30-31
[5] Gaetke L M ，Chow C K.Copper toxicity，oxidative stress ，and an tioxidant nutrients[J].Toxicology，2003（189）：147-163
[6]Malatt J.Fish gill structural changes induced by toxicants and other irritants：A statistical review[J].Can J Fish Aquat Sci，1985（42）：630-648
[7] 宋振荣.水产动物病理学[M].厦门：集美大学出版社，2000（中册）：39-42
[8] 赵典惠，刘丽波，孙际佳等.用美人鱼弧菌与创伤弧菌人工感染卵形鲳鯵的组织病理学研究 [J].大连水产学院学报，2007，22（6）：455-459
[9] 刘振勇，谢友佺，林小金.大黄鱼肝脏病变组织病理学观察 [J].海洋水产研究，2007，28（5）：7-11