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目的 研制一种制备工艺简单、无需鸡胚即可大量生产的预防季节性H3亚型流感重组腺病毒候选疫苗.方法 构建含有外源H3HA基因的重组腺病毒穿梭载体质粒pacAd5 H3HA,并用酶切的方法进行鉴定;将鉴定阳性的pacAd5-H3HA与腺病毒骨架载体质粒线性化后用脂质体介导共转染HEK293细胞,分别采用RT-PCR、间接免疫荧光试验以及Western blot方法对构建的H3亚型流感重组腺病毒疫苗进行鉴定. 结果 RT-PCR扩增出约1.8 kb片段,与目的片段大小相同,表明外源基因H3HA成功插入重组腺病毒.间接免疫荧光试验显示重组腺病毒转染后的HEK293细胞中检测到特异性蛋白,Western blot显示在70 ku处有一反应条带,表明该H3HA蛋白能被兔抗H3亚型HA蛋白血清识别. 结论 构建的H3亚型流感重组腺病毒能在HEK293细胞中表达具有反应原性的H3HA蛋白,为后续的动物实验奠定了基础.