【摘 要】
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新城疫病毒Ⅰ系苗Mukteswar株为中等毒力,野外分离株JS/7/05/Ch的基因组核苷酸与其具有高于99%的相似性,但其毒力却明显强于前者。为了给基因Ⅲ型NDV的遗传进化机制研究提供
【机 构】
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扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金(31172338);现代农业产业技术体系建设专项资金(nycytx-41-G07);公益性行业(农业)专项经费(201003012)
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新城疫病毒Ⅰ系苗Mukteswar株为中等毒力,野外分离株JS/7/05/Ch的基因组核苷酸与其具有高于99%的相似性,但其毒力却明显强于前者。为了给基因Ⅲ型NDV的遗传进化机制研究提供基础,本研究成功构建了JS/7/05/Ch株的反向遗传平台。首先根据GenBank上公布的基因Ⅲ型新城疫病毒JS/7/05/Ch株基因组全序列设计并合成8对引物,RT-PCR扩增目的片段后,分别依次亚克隆至pCR2.1载体中构建含有JS/7/05/Ch全长基因组cDNA的克隆质粒pJS/7/05/Ch,然后再通过特异性酶切位点将JS/7/05株全长基因组cDNA转移到TVT7R(0.0)转录载体中,成功构建出含JS/7/05/Ch株基因组全长cDNA的转录质粒pTVT/JS705。然后将该质粒与3个辅助质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,转染60h后将该细胞及其上清接种鸡胚;血凝(HA)试验和RT-PCR结果表明JS/7/05/Ch株新城疫病毒被成功拯救。
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