【摘 要】
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目的 制备肠炎沙门菌菌影并对其作为疫苗载体的特性进行研究. 方法 以带有噬菌体裂解基因E的溶菌质粒为模板,温控溶菌盒EBOX经PCR扩增和酶切后重组到pBBR1MCS2载体中并导入沙
【机 构】
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扬州大学医学院/转化医学研究院,江苏省中西医结合老年病防治重点实验室,江苏扬州225001
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目的 制备肠炎沙门菌菌影并对其作为疫苗载体的特性进行研究. 方法 以带有噬菌体裂解基因E的溶菌质粒为模板,温控溶菌盒EBOX经PCR扩增和酶切后重组到pBBR1MCS2载体中并导入沙门菌,经42℃诱导表达后测定裂解效率;将真核表达载体pEGFP-N1负载沙门菌菌影后转染小鼠巨噬细胞,荧光显微镜观察和流式细胞仪检测GFP的表达情况;用负载重组质粒pVAX1-NspA的沙门菌菌影经口灌胃免疫BALB/c小鼠,ELISA检测诱导抗体产生情况. 结果 重组菌诱导后的裂解效率达99％.沙门菌菌影负载pEGFP-N1转染小鼠巨噬细胞后可检测到GFP的表达.3次免疫两周后,负载重组质粒pVAX1-NspA沙门菌菌影免疫小鼠特异性血清IgG水平和黏膜IgA水平(A450值)分别为0.60±0.05和0.53±0.06,负载pVAX1沙门菌菌影免疫组分别为0.32±0.07和0.22±0.03,差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 制备的肠炎沙门菌菌影免疫能诱导特异性IgG和IgA抗体产生,可作为疫苗载体介导抗原的表达.
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