探索体外缺血缺氧条件下丁苯酞促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)形成血管及其与血管内皮生长因子/血管内皮生长因子受体2(VEGF/VEGFR2)－Notch1/Dll4信号的相关性。
方法对HUVEC传代培养后设置对照组、模型组、丁苯酞干预组(高剂量组和低剂量组)，调整细胞浓度为1×105个/ml，每组从均匀的细胞悬液中直接加入1 ml(即每组细胞1×105个)，模型组和丁苯酞干预组均为缺血缺氧条件下培养的HUVEC，丁苯酞高、低剂量组使用含有终浓度分别为20 μmol/L和5 μmol/L的丁苯酞培养基进行培养。采用细胞增殖活性检测法检测各组细胞的细胞活力，细胞划痕实验检测各组细胞的迁移能力，体外血管形成实验检测各组细胞的成管能力，蛋白质印迹法检测受体蛋白VEGFR2、Notch1和配体Dll4的表达水平，ELISA法检测培养基中VEGF的表达水平，实时荧光定量PCR检测VEGF、VEGFR2、Notch1、Dll4的mRNA表达水平。
结果丁苯酞可以提高缺血缺氧条件下HUVEC的存活率，低剂量组和高剂量组在培养6、12、24、48 h过程中，细胞存活率为78.6%±3.0%、59.6%±5.3%、44.6%±4.2%、38.2%±4.3%和88.6%±6.3%、67.5%±5.4%、53.3%±4.2%、46.3%±3.9%，与模型组比较差异均有统计学意义(75.2%±5.8%、53.2%±4.8%、36.2%±7.8%，22.5%±4.1%；t＝4.513、6.231、9.322、9.674，P＝0.021、0.018、0.026、0.015；t＝8.123、11.211、12.312、14.154，P＝0.001、0.002、0.001、0.001)。细胞迁移实验中丁苯酞低剂量组和高剂量组的细胞迁移能力分别为52.3%±4.2%和87.5%±5.2%，较模型组(18.5%±3.2%)及对照组(22.3%±4.1%)均明显升高(t＝18.324、15.183，P＝0.000、0.000；t＝22.142、19.341，P＝0.000、0.000)。蛋白检测中，丁苯酞低剂量组和高剂量组VEGFR2、Notch1以及Dll4的相对表达量为1.12±0.17、0.35±0.07、0.42±0.08和1.30±0.15、0.41±0.10、0.48±0.11，相比模型组(0.82±0.05、0.30±0.03、0.32±0.04)明显升高(t＝6.120、2.123、4.112，P＝0.000、0.020、0.003; t＝8.122、3.851、5.130，P＝0.000、0.000、0.001)。丁苯酞低剂量组和高剂量组中VEGF、VEGFR2、Notch1和Dll4的mRNA表达水平分别为0.43±0.08、0.41±0.05、0.38±0.03、0.36±0.04和0.58±0.05、0.50±0.06、0.41±0.05、0.52±0.06，相比模型组(0.28±0.03、0.34±0.04、0.27±0.03、0.19±0.04)差异均具有统计学意义(t＝3.122、3.825、4.311、5.211，P＝0.000、0.006、0.001、0.000；t＝4.225、4.872、5.311、8.220，P＝0.000、0.000、0.000、0.000)。
结论丁苯酞可以在体外缺血缺氧条件下促进HUVEC形成血管，其机制可能与VEGF/VEGFR2－Notch1/Dll4信号的激活有关，这可能是丁苯酞改善急性缺血性卒中脑微循环的机制之一。