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摘要 为了筛选防治板栗疫病的高效、低毒、低残留杀菌剂，采用菌丝生长速率法测定了10种杀菌剂对栗疫病菌菌丝生长的抑制效果。结果表明，苯醚甲环唑 丙环唑、苯醚甲环唑、咯菌腈、咪鲜胺和多氧霉素对栗疫病菌具有很强的抑制作用，EC50在0.0148～8.752 ug/mL之间，为生产上有效地防治板栗疫病提供了依据。
关键词 板栗疫病；栗疫病菌；杀菌剂；生物测定
中图分类号 S436.64
由栗疫病菌[Cryphonectria parasitica(Murr．)Barr]引起的板栗疫病又称干枯病、胴枯病、溃疡病，是板栗的主要病害，主要危害树干和主枝，引起树皮腐烂，少数枝梢枯萎。19世纪末20世纪初，该病使美洲栗遭到灭种的威胁。板栗疫病在我国分布广泛，多数板栗产区均有不同程度的发生。防治板栗疫病使用的药剂一般有代森锰锌(Ditha-nero-45)、石硫合剂、抗菌剂402、70％甲基托布津、多菌灵和武夷菌素等等，缺乏有效的新型高效杀菌剂，生产上对板栗疫病的防治也不够重视。中国板栗产量为世界之最，年均增长率约为6．8％，到2005年底，我国板栗种植面积达125万hm2，占世界种植面积的38％，总产量达82.5万t，约占世界产量的3/4。板栗疫病的防治问题也显得更为突出。本试验旨在通过室内生物测定，筛选出对栗疫病菌具有高效、低毒、低残留的新型杀菌剂，为板栗疫病的田间防治提供依据。
1 材料与方法
1．1 试验材料
1．1．1 供试菌株
采用常规组织分离法，从北京地区板栗疫病的树干病组织中分离栗疫病菌，本试验所用23号菌株经致病性测定和单分生孢子的分离，保存在PDA培养基上备用。
1．1．2 培养基
马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)。
1．1．3 供试杀菌剂
共10种，分别为嘧菌酯(25％阿米西达悬浮剂，瑞士先正达作物保护有限公司)、恶霉灵 甲霜灵(30％瑞苗清水剂，日本三共AGRO株式会社)、氢氧化铜(57.6％冠菌清干粒剂，澳大利亚新农有限公司)、苯醚甲环唑 丙环唑(30％爱苗乳油，瑞士先正达作物保护有限公司)、多氧霉素(10％宝丽安可湿性粉剂，日本科研制药株式会社)、苯醚甲环唑(10％世高水分散粒剂，瑞士先正达作物保护有限公司)、精甲霜灵 代森锰锌(68％金雷水分散粒剂，瑞士先正达作物保护有限公司)。98％咪鲜胺(施保克)和95.8％咯菌腈(适乐时)2种原药由中国农业大学种子病理与药理实验室提供。以常规杀菌剂98％多菌灵作为药剂对照。
1．2 试验方法
采用菌丝生长速率抑制法。将供试杀菌剂分别稀释成系列浓度梯度的母液，按一定比例加入到融化好的PDA培养基中，混匀后倒入灭菌的培养皿中，制成系列浓度梯度的含药培养基平板。供试的栗疫病菌菌株在PDA培养基上培养，菌落长至培养皿近边缘时，用直径5 mm的打孔器在菌落边缘打取菌落块，移置到上述含药的培养基平板中央，每皿接一个菌落块。每个浓度重复3皿，以加入同等无菌水或溶剂的PDA培养基为对照。25℃恒温下培养5 d后测量菌落直径。按以下公式计算药剂对菌丝生长的抑制率：
菌丝生长抑制率＝(对照菌落直径－菌饼直径)－(处理菌落直径－菌饼直径)/(对照直径－菌饼直径)×100％。
将菌丝生长抑制率转换成几率值(y)、药剂浓度(ug/mL)转换成以10为底的对数值(x)，作回归直线，求出毒力回归方程(y=a bx)和相关系数(r)，计算杀菌剂对栗疫病菌菌丝生长抑制的有效中浓度(EC50，以此表示杀菌剂对栗疫病菌抑制作用的强弱。
2 结果与分析
杀菌剂对板栗疫病菌菌丝生长的抑制作用测定的结果表明，10种杀菌剂对栗疫病菌分别表现出不同的抑制效果，抑制作用差异较大，其中苯醚甲环唑 丙环唑、苯醚甲环唑、咯菌腈3种杀菌剂对栗疫病菌的菌丝生长具有极强的抑制作用，抑制效果明显优于常规杀菌剂多菌灵，EC50分別为0.014 8、0.035 8ug/mL和0.067 6ug/mL；咪鲜胺的抑制作用与多菌灵相近，EC50为0.325 6ug/mL；多氧霉素对栗疫病菌的抑制效果也比较好，EC50为8.752ug/mL；精甲霜灵 代森锰锌的抑制作用次之，EC50为20.883ug/mL。其他3种杀菌剂氢氧化铜、嘧菌酯和恶霉灵 甲霜灵的抑制作用较差，EC50值远高于其他7种杀菌剂。10种杀菌剂对栗疫病菌的毒力曲线见图1，对栗疫病菌的抑制作用的回归方程、相关系数和抑制中浓度EC50见表1。
3 讨论
本试验测试了10种杀菌剂对栗疫病菌菌丝生长的抑制效果，筛选出苯醚甲环唑 丙环唑、苯醚甲环唑、咯菌腈、咪鲜胺和多氧霉素等对板栗疫病菌均表现出很强的抑菌活性。这些杀菌剂都是一些新型的高效、低毒、低残留杀菌剂，它们有着不同的作用方式，如咯菌腈通过抑制葡萄糖磷酰化有关的转移，并抑制真菌菌丝体的生长，最终导致病菌死亡。咪鲜胺、苯醚甲环唑等制甾醇的生物合成，多氧霉素则干扰真菌细胞壁几丁质的生物合成。其有效成分也有所区别(表1)，所得结果能够反映不同类型杀菌剂对栗疫病菌的抑制作用程度。本试验结果为板栗疫病的田间药剂防治和药剂的轮换使用提供了试验依据。各板栗园可根据实际情况从中选择适宜的杀菌剂种类进行合理用药，如采用刮树皮后涂药或涂药泥等方式进行。
关键词 板栗疫病；栗疫病菌；杀菌剂；生物测定
中图分类号 S436.64
由栗疫病菌[Cryphonectria parasitica(Murr．)Barr]引起的板栗疫病又称干枯病、胴枯病、溃疡病，是板栗的主要病害，主要危害树干和主枝，引起树皮腐烂，少数枝梢枯萎。19世纪末20世纪初，该病使美洲栗遭到灭种的威胁。板栗疫病在我国分布广泛，多数板栗产区均有不同程度的发生。防治板栗疫病使用的药剂一般有代森锰锌(Ditha-nero-45)、石硫合剂、抗菌剂402、70％甲基托布津、多菌灵和武夷菌素等等，缺乏有效的新型高效杀菌剂，生产上对板栗疫病的防治也不够重视。中国板栗产量为世界之最，年均增长率约为6．8％，到2005年底，我国板栗种植面积达125万hm2，占世界种植面积的38％，总产量达82.5万t，约占世界产量的3/4。板栗疫病的防治问题也显得更为突出。本试验旨在通过室内生物测定，筛选出对栗疫病菌具有高效、低毒、低残留的新型杀菌剂，为板栗疫病的田间防治提供依据。
1 材料与方法
1．1 试验材料
1．1．1 供试菌株
采用常规组织分离法，从北京地区板栗疫病的树干病组织中分离栗疫病菌，本试验所用23号菌株经致病性测定和单分生孢子的分离，保存在PDA培养基上备用。
1．1．2 培养基
马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)。
1．1．3 供试杀菌剂
共10种，分别为嘧菌酯(25％阿米西达悬浮剂，瑞士先正达作物保护有限公司)、恶霉灵 甲霜灵(30％瑞苗清水剂，日本三共AGRO株式会社)、氢氧化铜(57.6％冠菌清干粒剂，澳大利亚新农有限公司)、苯醚甲环唑 丙环唑(30％爱苗乳油，瑞士先正达作物保护有限公司)、多氧霉素(10％宝丽安可湿性粉剂，日本科研制药株式会社)、苯醚甲环唑(10％世高水分散粒剂，瑞士先正达作物保护有限公司)、精甲霜灵 代森锰锌(68％金雷水分散粒剂，瑞士先正达作物保护有限公司)。98％咪鲜胺(施保克)和95.8％咯菌腈(适乐时)2种原药由中国农业大学种子病理与药理实验室提供。以常规杀菌剂98％多菌灵作为药剂对照。
1．2 试验方法
采用菌丝生长速率抑制法。将供试杀菌剂分别稀释成系列浓度梯度的母液，按一定比例加入到融化好的PDA培养基中，混匀后倒入灭菌的培养皿中，制成系列浓度梯度的含药培养基平板。供试的栗疫病菌菌株在PDA培养基上培养，菌落长至培养皿近边缘时，用直径5 mm的打孔器在菌落边缘打取菌落块，移置到上述含药的培养基平板中央，每皿接一个菌落块。每个浓度重复3皿，以加入同等无菌水或溶剂的PDA培养基为对照。25℃恒温下培养5 d后测量菌落直径。按以下公式计算药剂对菌丝生长的抑制率：
菌丝生长抑制率＝(对照菌落直径－菌饼直径)－(处理菌落直径－菌饼直径)/(对照直径－菌饼直径)×100％。
将菌丝生长抑制率转换成几率值(y)、药剂浓度(ug/mL)转换成以10为底的对数值(x)，作回归直线，求出毒力回归方程(y=a bx)和相关系数(r)，计算杀菌剂对栗疫病菌菌丝生长抑制的有效中浓度(EC50，以此表示杀菌剂对栗疫病菌抑制作用的强弱。
2 结果与分析
杀菌剂对板栗疫病菌菌丝生长的抑制作用测定的结果表明，10种杀菌剂对栗疫病菌分别表现出不同的抑制效果，抑制作用差异较大，其中苯醚甲环唑 丙环唑、苯醚甲环唑、咯菌腈3种杀菌剂对栗疫病菌的菌丝生长具有极强的抑制作用，抑制效果明显优于常规杀菌剂多菌灵，EC50分別为0.014 8、0.035 8ug/mL和0.067 6ug/mL；咪鲜胺的抑制作用与多菌灵相近，EC50为0.325 6ug/mL；多氧霉素对栗疫病菌的抑制效果也比较好，EC50为8.752ug/mL；精甲霜灵 代森锰锌的抑制作用次之，EC50为20.883ug/mL。其他3种杀菌剂氢氧化铜、嘧菌酯和恶霉灵 甲霜灵的抑制作用较差，EC50值远高于其他7种杀菌剂。10种杀菌剂对栗疫病菌的毒力曲线见图1，对栗疫病菌的抑制作用的回归方程、相关系数和抑制中浓度EC50见表1。
3 讨论
本试验测试了10种杀菌剂对栗疫病菌菌丝生长的抑制效果，筛选出苯醚甲环唑 丙环唑、苯醚甲环唑、咯菌腈、咪鲜胺和多氧霉素等对板栗疫病菌均表现出很强的抑菌活性。这些杀菌剂都是一些新型的高效、低毒、低残留杀菌剂，它们有着不同的作用方式，如咯菌腈通过抑制葡萄糖磷酰化有关的转移，并抑制真菌菌丝体的生长，最终导致病菌死亡。咪鲜胺、苯醚甲环唑等制甾醇的生物合成，多氧霉素则干扰真菌细胞壁几丁质的生物合成。其有效成分也有所区别(表1)，所得结果能够反映不同类型杀菌剂对栗疫病菌的抑制作用程度。本试验结果为板栗疫病的田间药剂防治和药剂的轮换使用提供了试验依据。各板栗园可根据实际情况从中选择适宜的杀菌剂种类进行合理用药，如采用刮树皮后涂药或涂药泥等方式进行。