【摘 要】
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目的 建立H5N1禽流感假病毒的体外中和试验技术平台,并系统评价2份H5N1人禽流感患者恢复期血清的中和效价.方法 通过磷酸钙沉淀法将转移载体pHR-Luc、包装载体pCMV△8.2和包
【机 构】
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武汉大学人民医院传染病科,中国科学院上海生命科学院,深圳市第三人民医院肝病研究所
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目的 建立H5N1禽流感假病毒的体外中和试验技术平台,并系统评价2份H5N1人禽流感患者恢复期血清的中和效价.方法 通过磷酸钙沉淀法将转移载体pHR-Luc、包装载体pCMV△8.2和包膜载体CMV/R-SZ(或CMV/R-TH)共转染人胚肾细胞(293T),72 h后收集假病毒上清液,免疫印迹(Western blot)鉴定假病毒颗粒HA、P24蛋白的表达,并取200μL假病毒上清液测定感染活性.收集制备假病毒过程中整合HA蛋白的293T细胞,通过流式细胞术测定2份恢复期血清中的HA抗体.利用2份恢复期血清分别与深圳株和泰国株假病毒进行中和试验,通过计算IC5o判断不同血清对2株假病毒中和效价的差异.结果 构建的2株假病毒颗粒不仅含有HIV基质蛋白P24,还可以整合HA蛋白,并且能够由前体蛋白HA0裂解为具有生物活性的HA1和HA2.200μL假病毒上清液感染靶细胞后RLA值约为2×104,具有较高的感染效价.FACS检测结果显示2份血清中均含有HA抗体,而且对不同分枝的假病毒具有交叉反应性.中和试验表明2份血清对深圳株和泰国株假病毒均具有中和能力,而且对不同分枝的假病毒具有交叉中和活性,但对深圳株的中和效价均高于泰国株.结论 本研究成功构建具有感染活性的深圳株和泰国株H5N1禽流感假病毒,并可以快速、安全、高效的评价血清的中和效价,具有广阔的应用前景.
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