【摘 要】
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目的 探讨活性氧(ROS)在线粒体KATP(Mito-KATP)通道特异性开放剂二氮嗪预处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用及其机制.方法 培养的成年大鼠心室肌细胞,随机分为5组:对
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目的 探讨活性氧(ROS)在线粒体KATP(Mito-KATP)通道特异性开放剂二氮嗪预处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用及其机制.方法 培养的成年大鼠心室肌细胞,随机分为5组:对照组、缺氧复氧组、二氮嗪预处理+缺氧复氧组、二氮嗪+ROS清除剂2-硫基丙酰氨基乙酸(MPG)预处理+缺氧复氧组、二氮嗪+蛋白激酶C特异性抑制剂氯化白屈菜赤碱预处理+缺氧复氧组.对照组常规培养;缺氧复氧组缺氧30 min复氧40 min;其余各组则加入相应的药物预处理10 min,二氮嗪、MPG、氯化白屈菜赤碱的终浓度分别为200、400、2 μmol·L-1,更换无血清培养基培养20 min,然后缺氧30 min复氧40 min.采用MTY法、CK检测试剂、Na+-K+-ATPase活性检测试剂和Western blot等方法分别检测心肌细胞的活力、CK活性、Na+-K+-ATPase活性、细胞浆和细胞膜PKCε表达情况,计算细胞膜PKCε表达百分比.结果 缺氧复氧可导致心肌细胞存活率及Na+-K+-ATPase活性降低,CK活性升高;二氮嗪预处理能增加细胞存活率及Na+-K+-ATPase活性,降低CK活性,增加细胞膜PKCε表达百分比;MPG抑制了二氮嗪预处理的心肌保护作用,并且在一定程度上抑制了PKCε的转位;CH可完全阻滞PKCε的转位,并且可降低二氮嗪预处理的心肌保护作用.结论 Mito-KATP通道开放后释放的ROS参与了二氮嗪预处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤,其机制与PKCε的转位激活有关.
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