建立了同时测定大鼠血浆中3种细胞色素P450(CYP450)亚型酶(CYP1A2、CYP2C9、CYP3A4)活性的Cocktail探针药物的高效液相色谱(HPLC)检测方法。分别取非那西丁,咪达唑仑和甲苯磺丁脲三种探针药物,制成混合探针溶液,用一种提取溶剂系统对3种探针药物同时提取,并用高效液相色谱法同时测定3种探针药物的血药浓度,并对其进行专属性、线性范围及检测限、精密度、回收率、稳定性的验证。色谱条件选用Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇-50 m M磷酸盐缓冲对(45∶55,p H 3.2);检测波长230 nm;流速1.0 m L/min;柱温35℃。结果表明:非那西丁、咪达唑仑、甲苯磺丁脲的线性范围分别为0.10~10.0μg/m L(r=0.9993),0.05~5.0μg/m L(r=0.9999),0.10~50.0μg/m L(r=0.9991);方法回收率分别为79.28%~87.91%,76.43%~85.36%,82.79%~90.61%。该HPLC检测方法快捷,准确,灵敏度高,可以在同一次试验中,同时测定大鼠血浆中3种CYP450亚酶探针药物(非那西丁,甲苯磺丁脲,咪达唑仑)的浓度,各探针药物的吸收峰分离完全,无干扰,可用于开展某些受试药物对大鼠CYP450的3个主要亚型酶(CYP1A2,CYP2C9,CYP3A4)调控作用的相关研究,从而为相关肝药酶代谢研究提供方法学参考。