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恶性肿瘤会对人体健康造成巨大危害,及早诊断、及早治疗有利于肿瘤的防治。随着科技的发展,肿瘤标志物的检测方法不断更新,在放射免疫酶联免疫化学发光固态芯片后,现在较常用的是液芯片。
液态芯片
液态芯片又称为流式荧光技术液相芯片悬浮阵列,是基于后基因时代而发展起来的,它可以将高速数字信号处理器和计算机运算法则进行有机的整合,具有高通量、高速度、成本低、灵敏度高、线性范围广等优点,可广泛应用于免疫分析核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析等研究,得到了权威机构及医学界共同认可[1]。
1997年,《临床化学》对多功能流式点阵仪及其技术有过专门介绍,并称其为“真正的临床应用型生物芯片”。随着其研究与应用,许多关于多功能流式点阵仪及其技术的文章,发表在《临床化学》、《临床与免疫诊断学》、《临床微生物》及《癌症》等国际权威的学术杂志上。2011年7月27日,INOVA公司的ENA系列流点式阵试剂率先通过美国FDA严格认证,表明多功能流点式阵仪及其技术得到了美国官方的高度认证。2005年6月9日,基于xMAP技术的论文刊登在《自然》上,这是学术界认可的一项技术所能给予的最高荣誉。2005年11月,-Frost&Sullivan-授予xMAP技术“2005年度国际临床诊断技术革新大奖”,表明其在国际临床诊断技术领域已有权威的认证。
液态芯片在肿瘤标志物检测中的应用
肿瘤是一个多因素、多阶段及多基因变异的复杂病变过程。目前临床上常用的肿瘤标志物都是肿瘤相关抗原,一种或几种肿瘤标志物异常可表明同一种肿瘤或不同类型的肿瘤,且不同的肿瘤可能会出现同一种肿瘤标志物,为提高肿瘤标志物辅助肿瘤的诊断,并确定哪种标志物可作为治疗后随访的检测指标。近年来,越来越多的专家建议选择几种灵敏度且特异性能够互补的肿瘤标志物,组成最佳组合进行联合检测。液芯出众的高通量检测性能正好契合了临床肿瘤标志物应用的需求。其基本原理:在不同荧光编码的微球上进行抗原-抗体反应,通过两束激光分别检测荧光信号和微球编码,实现对多种肿瘤标志指标的联合检测。
液态芯片属于发光类技术之一,具有灵敏度高、高速度、成本低、重复性好及线性范围广等的优点,且其具备了其他发光技术所没有的高通量检测能力,代表了临床肿瘤标志物的检测的应用趋势。截止2009年3月,目前液态芯片可做CEA、AFP、CA125、CA19-9、t-PSA、f-PSA、NEA、CA72-4、SCCA、Cyfra21-1、CA242和free-Hcg。隨着液芯肿瘤标志物检测试剂的上市,逐渐进入临床实验室和各大体检机构,其强大的检测能力和高质量的检测数据引起了国内临床检验界的广泛关注。北京301医院田亚平教授等利用液芯法检测了AFPCYFRA211CEANES多肿瘤标志物的浓度水平,就该检测技术进行了方法学评价(灵敏度、干扰试验、精密度和线性范围),并与罗氏E170电化学发光进行了比较分析(相关性分析)[2]。
方法学评价结果显示:在测定范围内,液态芯片法测定AFP、CYER11、CEA和NSE等指标的线性良好,批内变异系数2.43~9.23,批间变异系数4.76~984。与罗氏电化学发光比较结果显示液芯肿瘤标志物的检测试剂准确可靠,操作简便,值得推广使用。
展 望
目前,在核酸和蛋白质研究领域出现了一种全新的、称之为悬浮式点阵的检测手段和技术,该技术在很大程度上依赖最近在光电转换和数字信号处理的进步,通过一束激光识别高分子微球所产生的特异性荧光;另一束激光识别微球表面发生生物学反应后所产生的荧光信号,荧光编码不同的微球来实现检测指标的分类,进而实现高通量生物样品的分析;而通过生物学反应所产生的荧光信号可以实现分析的特异性。目前,这种基于荧光编码微球的高通量分析技术可提供快速、敏感、对一个样品进行至多可达100个分析指标的检测。应用时,把对应不同检测物的乳胶颗粒混合后再加入微量样品在悬液中与微球进行特异性结合。结合的结果可以在瞬间经激光判定后由电脑数据信息的形式记录下来。因为分子杂交是在悬浮溶液中进行,检测速度快,所以又有“液态芯片”之称。液态生物芯片技术是一种以徽球为基础的多指标数据采集和分析平台,起源于流式细胞仪。多指标检测是指在一个简单的试管中对一份样本同时进行多种指标的分析。在多指标检测方法中,荧光标记的抗体、抗原或者核酸探针为每种反应提供了特定的信号。由于每种荧光反应特异性的结合到靶分子上,这种靶分子与一种微球偶联,所以可溶性的反应物无需不同的标记。
液态芯片技术是流式细胞术(FCM)与酶联免疫吸附试验(ELISA)相结合的一种技术。其基本原理是两种荧光染料按照不同比例,把微小的乳胶颗粒分别染上百种不同偶的能发出荧光的颜色。然后再把针对不同检测物的蛋白以共价方式交联到不同颜色的微球上。应用时,先混合不同检测物的微球,再加入待测血清。悬液中抗体与待测血清中抗原相结合,再加入荧光标记的第二抗体。然后微球被微量液体传输系统排成点列,通过流式荧光点阵仪及流式荧光点阵仪内的一束激光判定微球的编号,另一束激光测定该编号微球上的荧光强度,通过电脑处理后获得待测物质的种类和待测物的含量。另外,液态芯片检测所需血清量非常少(10μl),而化学发光法(包括电化学发光)需要100~200μl血清。在检测速度上,液态芯片检测速度大大快于化学发光法。因此该方法适用于批量标本多指标检测,尤其适用于肿瘤高危人群的筛查及对肿瘤疑似患者进行辅助诊断。随着该技术相关试剂相继获得SPDA医疗器械注册证,可以预见液芯技术将引领肿瘤标志物检测进入真正的联检时代,大大提高肿瘤标志物的试剂应用价值。
参考文献
1 赵建军,马旭,汪朝晖.液态生物芯片技术及其应用.分析仪器,2008,6:382-384.
2 董振南,贾兴旺,田亚平.流式荧光法检测多肿瘤标志物的方法学评价.分析仪器,2008,1:22-25.
液态芯片
液态芯片又称为流式荧光技术液相芯片悬浮阵列,是基于后基因时代而发展起来的,它可以将高速数字信号处理器和计算机运算法则进行有机的整合,具有高通量、高速度、成本低、灵敏度高、线性范围广等优点,可广泛应用于免疫分析核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析等研究,得到了权威机构及医学界共同认可[1]。
1997年,《临床化学》对多功能流式点阵仪及其技术有过专门介绍,并称其为“真正的临床应用型生物芯片”。随着其研究与应用,许多关于多功能流式点阵仪及其技术的文章,发表在《临床化学》、《临床与免疫诊断学》、《临床微生物》及《癌症》等国际权威的学术杂志上。2011年7月27日,INOVA公司的ENA系列流点式阵试剂率先通过美国FDA严格认证,表明多功能流点式阵仪及其技术得到了美国官方的高度认证。2005年6月9日,基于xMAP技术的论文刊登在《自然》上,这是学术界认可的一项技术所能给予的最高荣誉。2005年11月,-Frost&Sullivan-授予xMAP技术“2005年度国际临床诊断技术革新大奖”,表明其在国际临床诊断技术领域已有权威的认证。
液态芯片在肿瘤标志物检测中的应用
肿瘤是一个多因素、多阶段及多基因变异的复杂病变过程。目前临床上常用的肿瘤标志物都是肿瘤相关抗原,一种或几种肿瘤标志物异常可表明同一种肿瘤或不同类型的肿瘤,且不同的肿瘤可能会出现同一种肿瘤标志物,为提高肿瘤标志物辅助肿瘤的诊断,并确定哪种标志物可作为治疗后随访的检测指标。近年来,越来越多的专家建议选择几种灵敏度且特异性能够互补的肿瘤标志物,组成最佳组合进行联合检测。液芯出众的高通量检测性能正好契合了临床肿瘤标志物应用的需求。其基本原理:在不同荧光编码的微球上进行抗原-抗体反应,通过两束激光分别检测荧光信号和微球编码,实现对多种肿瘤标志指标的联合检测。
液态芯片属于发光类技术之一,具有灵敏度高、高速度、成本低、重复性好及线性范围广等的优点,且其具备了其他发光技术所没有的高通量检测能力,代表了临床肿瘤标志物的检测的应用趋势。截止2009年3月,目前液态芯片可做CEA、AFP、CA125、CA19-9、t-PSA、f-PSA、NEA、CA72-4、SCCA、Cyfra21-1、CA242和free-Hcg。隨着液芯肿瘤标志物检测试剂的上市,逐渐进入临床实验室和各大体检机构,其强大的检测能力和高质量的检测数据引起了国内临床检验界的广泛关注。北京301医院田亚平教授等利用液芯法检测了AFPCYFRA211CEANES多肿瘤标志物的浓度水平,就该检测技术进行了方法学评价(灵敏度、干扰试验、精密度和线性范围),并与罗氏E170电化学发光进行了比较分析(相关性分析)[2]。
方法学评价结果显示:在测定范围内,液态芯片法测定AFP、CYER11、CEA和NSE等指标的线性良好,批内变异系数2.43~9.23,批间变异系数4.76~984。与罗氏电化学发光比较结果显示液芯肿瘤标志物的检测试剂准确可靠,操作简便,值得推广使用。
展 望
目前,在核酸和蛋白质研究领域出现了一种全新的、称之为悬浮式点阵的检测手段和技术,该技术在很大程度上依赖最近在光电转换和数字信号处理的进步,通过一束激光识别高分子微球所产生的特异性荧光;另一束激光识别微球表面发生生物学反应后所产生的荧光信号,荧光编码不同的微球来实现检测指标的分类,进而实现高通量生物样品的分析;而通过生物学反应所产生的荧光信号可以实现分析的特异性。目前,这种基于荧光编码微球的高通量分析技术可提供快速、敏感、对一个样品进行至多可达100个分析指标的检测。应用时,把对应不同检测物的乳胶颗粒混合后再加入微量样品在悬液中与微球进行特异性结合。结合的结果可以在瞬间经激光判定后由电脑数据信息的形式记录下来。因为分子杂交是在悬浮溶液中进行,检测速度快,所以又有“液态芯片”之称。液态生物芯片技术是一种以徽球为基础的多指标数据采集和分析平台,起源于流式细胞仪。多指标检测是指在一个简单的试管中对一份样本同时进行多种指标的分析。在多指标检测方法中,荧光标记的抗体、抗原或者核酸探针为每种反应提供了特定的信号。由于每种荧光反应特异性的结合到靶分子上,这种靶分子与一种微球偶联,所以可溶性的反应物无需不同的标记。
液态芯片技术是流式细胞术(FCM)与酶联免疫吸附试验(ELISA)相结合的一种技术。其基本原理是两种荧光染料按照不同比例,把微小的乳胶颗粒分别染上百种不同偶的能发出荧光的颜色。然后再把针对不同检测物的蛋白以共价方式交联到不同颜色的微球上。应用时,先混合不同检测物的微球,再加入待测血清。悬液中抗体与待测血清中抗原相结合,再加入荧光标记的第二抗体。然后微球被微量液体传输系统排成点列,通过流式荧光点阵仪及流式荧光点阵仪内的一束激光判定微球的编号,另一束激光测定该编号微球上的荧光强度,通过电脑处理后获得待测物质的种类和待测物的含量。另外,液态芯片检测所需血清量非常少(10μl),而化学发光法(包括电化学发光)需要100~200μl血清。在检测速度上,液态芯片检测速度大大快于化学发光法。因此该方法适用于批量标本多指标检测,尤其适用于肿瘤高危人群的筛查及对肿瘤疑似患者进行辅助诊断。随着该技术相关试剂相继获得SPDA医疗器械注册证,可以预见液芯技术将引领肿瘤标志物检测进入真正的联检时代,大大提高肿瘤标志物的试剂应用价值。
参考文献
1 赵建军,马旭,汪朝晖.液态生物芯片技术及其应用.分析仪器,2008,6:382-384.
2 董振南,贾兴旺,田亚平.流式荧光法检测多肿瘤标志物的方法学评价.分析仪器,2008,1:22-25.