【摘 要】
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目的:探讨RhoA/ROCK2通路在急性心肌梗死(AMI)后心脏成纤维细胞分化过程中的作用机制.方法:选取12只清洁级6～8周龄雄性C57小鼠,随机平均分为AMI组与假手术组,AMI组开胸结扎左前降支,假手术组仅作开胸处理.21 d后处死小鼠取心脏组织,通过免疫组织化学技术分别对比梗死区与正常区域RhoA与ROCK2表达情况,运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot技术检测组织匀浆中RhoA与ROCK2表达情况.体外培养人心肌成纤维细胞,随机分为处理组与对照组,处理组使用T
【机 构】
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200001 上海交通大学医学院附属仁济医院心血管外科
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目的:探讨RhoA/ROCK2通路在急性心肌梗死(AMI)后心脏成纤维细胞分化过程中的作用机制.方法:选取12只清洁级6～8周龄雄性C57小鼠,随机平均分为AMI组与假手术组,AMI组开胸结扎左前降支,假手术组仅作开胸处理.21 d后处死小鼠取心脏组织,通过免疫组织化学技术分别对比梗死区与正常区域RhoA与ROCK2表达情况,运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及Western blot技术检测组织匀浆中RhoA与ROCK2表达情况.体外培养人心肌成纤维细胞,随机分为处理组与对照组,处理组使用TGF-β1刺激12、24、48 h,对照组不作任何处理,分别利用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞外基质RhoA与ROCK2表达情况,细胞划痕及Transwell试验检测细胞迁移能力;利用小干扰RNA特异性敲低RhoA表达,再次检测相关蛋白表达及细胞迁移能力.结果:与假手术组相比,心梗组小鼠心肌RhoA、ROCK2的mRNA与蛋白水平均显著上升(P均<0.05);与对照组相比,处理组细胞RhoA、ROCK2、α-SMA的mRNA与蛋白表达水平及细胞迁移能力均随时间变化显著上升(P均<0.05);与TGF-β1+空白小干扰RNA组相比,TGF-β1+RhoA小干扰RNA组RhoA、ROCK2、α-SMA蛋白表达水平及细胞迁移能力均显著下降(P均<0.05).结论:RhoA与ROCK2蛋白在小鼠梗死心脏组织及TGF-β1刺激下分化的成纤维细胞中表达增加,RhoA/ROCK2通路可通过增强细胞迁移能力促进心脏成纤维细胞分化.
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