【摘 要】
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研究证实let-7c抑制细胞增殖是通过调控细胞分裂周期蛋白25的表达[1].我们拟观察微小RNA(miRNA,miR)-199a-5p与let-7c对肝癌细胞迁移及侵袭的影响.rn一、材料与方法rn1.材料:
【机 构】
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浙江大学医学院附属邵逸夫医院肿瘤内科,杭州,310016浙江省人民医院肿瘤内科,杭州,310014;
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研究证实let-7c抑制细胞增殖是通过调控细胞分裂周期蛋白25的表达[1].我们拟观察微小RNA(miRNA,miR)-199a-5p与let-7c对肝癌细胞迁移及侵袭的影响.rn一、材料与方法rn1.材料:慢病毒载体系统购自上海吉凯基因公司.细胞计数试剂盒(CCK-8)、实时荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)及Transwell试剂盒购自Invitrogen公司.rn2.方法:(1)检测miRNAs表达量:将重组慢病毒颗粒感染SMMC-7721细胞,72 h后,PCR方法检测miR-199a-5p及let-7c表达.(2)细胞增殖实验:实验分5组,分别为空白组、阴性对照组、miR-199a-5p组、let-7c组及miR-199a-5p与let-7c联合组.将感染后细胞以每孔1×104个接种于96孔板,分别于24、48、72 h进行CCK-8检测.(3)细胞迁移及侵袭实验:将感染病毒颗粒SMMC-7721及阴性对照组细胞各5×104个细胞种植于Transwell小室的上层,培养16h.经过结晶紫染色,在显微镜下计数膜下方的细胞后取平均值.
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